1. 检测目的基因是否导入受体细胞的方法
常用方法:基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌,枯草杆菌,土壤农杆菌,酵母菌和动植物细胞等。其中,对于细菌或植物细胞,常用质粒作为载体将目的基因导入细胞内;动物细胞则用显微注射的方法将目的基因导入动物受精卵的雄性原核中。
过程:用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞,主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如,如果运载体是质粒,受体细胞是细菌,一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后,就可以随着受体细胞的繁殖而复制,由于细菌的繁殖速度非常快,在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
2. 如何鉴定目的基因导入受体细胞
直接导入细胞基因无法表达,用质粒是为了用它强大的复制功能和将质粒上基因与染色体组基因整合的能力。
将目的基因导入受体细胞的过程,其导入的均为运载体.质粒作为运载体,是可以直接导入受体细胞的.只是没有与目的基因结合的质粒导入细胞中也没有作用,一般我们都人为地将它去除,即通过筛选只选出携带目的基因。
3. 检测目的基因是否导入受体细胞的方法PCR
1)获取目的基因:通过PCR或是直接合成目的基因等方法实现。
2)构建表达载体:将目的基因连接到载体上,该载体是人们已经完全清楚序列且稳定遗传的保守载体,通过连接酶将目的基因连接到载体上。3)将载体导入受体细胞:这一步即为转化,将连接产物与感受态细胞混合,冰浴后热休克,再放冰上几分钟,加入LB或soc等培养基复苏,最后将菌体涂布到含有载体上的抗性的抗生素平板上。最后通过蓝白斑筛选等方法选择出成功导入目的基因的受体细胞。4)目的基因的检测与表达 :根据实验的目的,设计合适的方法检测。
4. 检测目的基因是否导入受体细胞的方法的原理
导入时用的运载体上如果有抗性基因(标记基因),就可以通过检测抗性基因的表达来检测,比如运载体PBR322 就带有抗四环素基因和抗氨卞青霉素基因
要么就等目的基因在受体细胞中表达以后,然后根据特定的性状来区分
5. 检测目的基因是否导入受体细胞的方法有哪些
因为标记基因一般都是抗性基因,可以用相应的抗生素培养进行检验。
标记基因主要是检查运载提示否导入受体细胞。而且一般导入受体细胞的运载体是已经导入目的基因并经过培养的,不需要考虑没插入的情况
6. 检测导入受体细胞的基因是否表达
A重组DNA技术的基本定义
重组DNA技术是指将一种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序,也称为分子克隆技术。因此,供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
B 基因工程的基本定义
基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用,包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建(即重组DNA技术);而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
基因工程是利用重组技术,在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法,对各种生物的核酸(基因)进行改造和重新组合,然后导入微生物或真核细胞内进行无性繁殖,使重组基因在细胞内表达,产生出人类需要的基因产物,或者改造、创造新的生物类型。
从实质上讲,基因工程的定义强调了外源DNA分子的新组合被引入到一种新的寄主生物中进行繁殖。这种DNA分子的新组合是按工程学的方法进行设计和操作的,这就赋予基因工程跨越天然物种屏障的能力,克服了固有的生物种间限制,扩大和带来了定向创造生物的可能性,这是基因工程的最大特点。
基因工程包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接,构成新的重组的DNA,然后送到受体生物中去表达,从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。
基因工程要素:包括外源DNA,载体分子,工具酶和受体细胞等。
一个完整的、用于生产目的的基因工程技术程序包括的基本内容有:(1)外源目标基因的分离、克隆以及目标基因的结构与功能研究。这一部分的工作是整个基因工程的基础,因此又称为基因工程的上游部分;(2)适合转移、表达载体的构建或目标基因的表达调控结构重组;(3)外源基因的导入;(4)外源基因在宿主基因组上的整合、表达及检测与转基因生物的筛选;(5)外源基因表达产物的生理功能的核实;(6)转基因新品系的选育和建立,以及转基因新品系的效益分析;(7)生态与进化安全保障机制的建立;(8)消费安全评价
7. 检测目的基因是否导入受体细胞的方法探针
DNA分子杂交:是检验目的基因是否导入受体细胞,是用带有放射性元素的DNA一条链去和另一条连进行碱基互补配对;分子杂交是用RNA和一条DNA链杂交,是检测目的基因是否转录,都是看其是否出现杂交带;抗原抗体杂交就是蛋白质见的检测,是检测目的基因是否翻译,就像人体内特异性免疫一样。
互补的核苷酸序列通过Watson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针对已知序列进行特异性的靶序列检测。
杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的,也可以在细胞内杂交, 即细胞原位杂交。探针必须经过标记,以便示踪和检测。使用最普遍的探针标记物是同位素, 但由于同位素的安全性,发展了许多非同位素标记探针的方法,例如,使用荧光分子。