1. fitc发射光谱
目前用荧光探针作为检测信号的仪器，主要是考虑荧光标记所要检测的DNA的效率，以及荧光探针本身的发光效率和光谱特性。
1.末端标记：在引物上标记有荧光探针，在DNA扩增过程时，使新形成的DNA链末端带有荧光探针。
2.随机插入：选择四种缄机基，使其中一种或几种挂有荧光探针，在PCR过程中，带有荧光探针的碱基和不带荧光探针的碱基，同时参与DNA链的形成。由于带有荧光探针的碱基，可能影响PCR的产物，因此，需要调整荧光标记的碱基与未标记的碱基比率，以使得PCR产量和带有荧光探针的碱基在DNA的插入率达到一个平衡的水平，使杂交信号最强。主要考虑以下几个因素：荧光探针的激发和发射频谱；荧光探针的发光效率；荧光探针对PCR或逆转录效率的影响；不同荧光探针的发射光谱是否有重叠。常用的荧光探针：FITC，CY-3，ALEAX488，CY-5，ALEAX564
2. FITC光谱
分子所处的外界环境，如温度、溶剂、pH、荧光熄灯灭剂等都会影响荧光效率，甚至影响分子结构及立体构象，从而影响荧光光谱和荧光强度。1、温度温度对于溶液的荧光强度有着显著的影响。在一般情况下，随着温度的升高，荧光物质溶液的荧光效率和荧光强度将降低。这是因为，当温度升高时，分子运动速度加快，分子间碰撞概率增加，使无辐射跃迁增加，从而降低了荧光效率。例如，荧光素钠的乙醇溶液，在0℃以下，温度每降低10℃，在荧光效率增加3％，在—80℃时，荧光效率φf为1。2、溶剂同一物质在不同溶剂中，其荧光光谱的位置和强度都有差别。一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增大而长移，荧光强度也有增强。这是因为在极性溶剂中，π→π*跃迁需要的能量差ΔE小，而且跃迁概率增加，使紫外吸收和荧光波长均向长移，强度也增强。溶剂粘度减小时，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响，一般式温度上升，溶剂粘度变小，因此温度上升荧光强度下降。3、pH的影响当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响，这主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同，在不同酸度中分子和离子间的平衡改变，因此荧光强度也有差异。在每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式，也就有相应的pH范围，一保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。苯胺在pH为7~12的溶液中主要以分子形式存在，由于—NH2为提高荧光效率的取代基，故苯胺分子会发生蓝色荧光。但在pH＜2和pH＞13的溶液中均以苯胺离子形式存在，故不能发射荧光。4.荧光熄灭剂荧光熄灭又称荧光猝灭，是指荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。荧光熄灭剂可以促进这种现象的发生。5.散射光散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长比入射光波长更长的拉曼光，因其波长与荧光波长接近，对荧光测定的干扰更大，必须采取措施消除。
3. fitc的紫外吸收光谱
488是绿光，594是红光。
Alexa Fluor 488和Alex Fluor594标记二抗为Proteintech（PTG）生产的原装产品，，用于免疫荧光染色。
Alexa Fluor 488是一种常用的非常明亮的绿色荧光探针。它比绝大部分常用的绿色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。Alexa Fluor 488的荧光光谱与FITC和Cy2比较接近。Alexa Fluor 594是一种红色的荧光探针，与罗丹明一致。
4. FITC荧光波长
根本没有fitc激发波长和发射波长怎么用，原来是只有以下答案。通常情况下，没有其他，1.因为如果/判断方法不同： 激发波长是说用什么波长的光去激发荧光,可以用紫外或者可见光，发射波长是说发射出来的荧光的波长,一般的可见光波长的肉眼就能大致判断了。
2、分辨率不同： 激光波长对杂散光及信噪比的影响十分显著，当狭缝宽度不变时，用氩激光514.5nm比用488.0nm波长激发样品，杂散光要小一到二
5. FITC荧光光谱
异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料，目前，这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。在 495/517 nm 处，该染料会产生激发/发射峰值，并可借助异硫氰酸盐反应基团与不同抗体结合，该基团可以和蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合。而它的基本成分—— 荧光素，其摩尔质量为 332 g/mol，常被用作荧光示踪剂。FITC(389 g/mol) 是用于荧光显微镜技术的首批染料，且其被当成 Alexa Fluor®488 等后续荧光染料的发端。
该染料的荧光活性取决于它的大共轭芳香电子系统，而该系统受蓝色光谱中的光所激发。
6. fitc激发和发射波长
488是绿色荧光。其最大吸收波长在493nm,相应的最大发射波长是518nm，fitc（fluoresceinisothiocyanate，异硫氰酸荧光素）是一种绿色荧光团，在免疫学实验里，经常被用于荧光团标记到相应的检测分子，如抗体上。fitc的纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。