1. 流式细胞仪滤光片主要分为
紫色激光器荧光染料 405 nm 激发。适用于丰度较高的抗原。
绿色和黄绿色激光器的荧光染料 532 561 nm 激发。用于配有合适的滤光片通道的流式细胞仪光耐受强并且不依赖于PH值,是荧光显微镜技术的最佳选择
蓝光激光器荧光染料 488 nm 激发。适用于荧光显微镜技术。
红光激光器荧光染料 633 nm 激发。适用于配备氦氖激光器或红色二极管激光器的流式细胞仪。
2. 流式细胞仪滤光片主要分为哪两种
是荧光样品,就应该都可使用以上仪器检测(只用TIRF受一些限制)。但是实际应用时,大家可能会碰到某些样品可以使用流式和显微镜,但是无法使用共聚焦。为什么?解释一下:
首先,荧光检测必须有激发光照明,染料被特定波长的光照射以后才能发射荧光。激发光源有两种:1)白光(汞灯、氙灯等),然后通过滤光片选择只通过特定波长的光。如检测GFP时,大家能看到蓝光照射在样品上,因为GFP的激发条件是488nm 光。但是有一点,显微镜不可能装无限多的滤光片,所以选择是有限的。2)激光,普通的激光器只能发射特定波长的光,且数量有限,常见的是405、488、514、543、633等,所以可使用的染料也是有限。因此,大家判定仪器能否满足你实验要求,务必先看看激发条件是否合适。
其次,在光检测器(PMT、CCD)前还有一块滤光片,作用是反射样品各种散射光,只通过特定波长的荧光,提高信噪比,得到干净的背景。因此,这块滤光片也决定了仪器能否满足你的实验要求(不用太担心,这个一般和激发滤光片配套,不会有太多问题)。而在光谱型共聚焦里,使用的是棱镜或衍射光栅分光,可以选择通过任意需要的波段。这对使用量子点做标记的同学特别有好处!
3. 流式细胞仪常用的荧光素
目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合,标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光,通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。
4. 流式细胞仪包括
你这个图横坐标代表的是相对荧光强度,纵坐标代表的是细胞计数。
图的含义就是在每个荧光强度有多少细胞。估计你用了氧化敏感的荧光指针,ROS反应后荧光增加。所以你应该先用对照组设一个阈值,看实验组的荧光强度有没有高于或者低于该阈值。
5. 流式细胞仪的散射光参数包括
流式细胞仪的数据显示方式有如下几种:
(一)单参数直方图
单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同,横坐标可以是线性标度或对数标度。用“信道”来表示,实质上是所测的荧光或散射光的强度。纵坐标一般表示的是细胞的相对数。只能显示一个参数与细胞之间的关系是它的局限性。
(二)双参数直方图
双参数直方图是一种细胞数与双测量参数的图形。常见有以下三种:
1.二维点图:能够显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系。横坐标和纵坐标分别为与细胞有关的两个独立参数,平面上每一个点表示同时具有相应坐标值的细胞存在。可以由二维点图得到两个一维直方图,但是由于兼并现象存在,二维点图的信息量要大于两个一维直方图的信息量。所谓兼并就是说多个细胞具有相同的二维坐标在图上只表现为一个点,这样对细胞点密集的地方就难于显示它的精细结构。
2.二维等高图:类似于地图上的等高线表示法。它是为了克服二维点图的不足而设置的显示方法。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数,即“等高”。曲线层次越高所代表的细胞数越多。一般层次所表示的细胞数间隔是相等的,因此等高线越密集则表示变化率越大,等高线越疏则表示变化平衡。
3.假三维图:是利用计算机技术对二维等高图的一种视觉直观的表现方法。它把原二维图中的隐坐标-细胞数同时显现,但参数维图可以通过旋转、倾斜等操作,以便多方位的观察“山峰”和“谷地”的结构和细节,这无疑是有助于对数据进行分析的。假三维图列表模式其实只是多参数数据文件的一种计算机存储方式,三个以上的参数数据显示是用多个直方图、二维图和假三维图来完成的。
(三)三参数直方图
目前,由于计算机软件的发展,很多商品化的软件均提供三参数直方图功能,医学教育'网搜集整理意指这一类直方图的三维坐标均为参数而非细胞数。这种立体图以点图为显示方式,同样可以作全方位旋转以便仔细观察。
(四)流式细胞仪的多参数分析
当细胞标记了多色荧光在流式细胞仪上被激光激发后,所得到的荧光信号和散射信号可以根据需要组合分析以获得所需的信息,这就是流式细胞仪的多参数分析。
6. 流式细胞仪的滤光片
从多方面考虑,Cytek全光谱流式仪解决方案具有以下的优点:
1.实现少激光便能完成高复杂度的实验,有效降低维护成本。
2.可以选择任何能被机载激光激发的染料,并且能在一个实验中使用光谱高度重叠的染料。
3.减少仪器设置时间及每日运行成本。无需进行滤光片更换,操作流程简单,消耗品成本低。
4.从每一个多色管中能够获取更多信息。能够储存单染管的光谱从而减少样本制备时间。
5.仪器安装需求简单,操作易上手,只需要2天的培训便可学会使用。
7. 流式细胞仪的主要组成部分包括
流式细胞仪(Flow cytometer )是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。
多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。
8. 流式细胞仪滤光片主要分为哪几种
能衰减激光强度,改变激光光谱成分或限定激光振动方向。