1. 反射滤光片与透射滤光片差异
1、用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的电灯，除去荧光显微镜的防尘罩，确保荧光显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。
2、将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。
3、打开荧光显微镜电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多按几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到Zda发光效率，即可开始工作。
4、灯泡的调中：
①任选一块标本放在荧光显微镜载物台上。
②转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路，并将25荧光物镜转入光路。
③调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。
④前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至Zda。
⑤转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。
⑥调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。
⑦调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。
⑧转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。
5、荧光观察：
①将荧光染色标本放到荧光显微镜载物台上。
②将10x平场物镜或25x荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。
③转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律：激发滤光片的透射波长<双色束分离器的透射波长<阻断滤光片的透射波长。
④调节粗调手轮，当看清荧光图像轮廓后，再用微调手轮调焦，直至看到清晰的荧光图像。
⑤当需要得到较强的荧光图像时，可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路，可获得较明亮的荧光图像。
⑥当需要使用40x或100x荧光物镜观察时，应在标本和物镜间加上甘油，油中不能有影响观察的小泡或杂质。使用时可使甘油慢慢浸润一会儿，然后轻轻左右来回转动物镜转换器以排除气泡。
6、荧光显微摄影
由于荧光图像一般均较明场观察暗得多，所以进行荧光显微摄影需要较长的曝光时间，在曝光时应注意避免荧光显微镜震动。为了缩短曝光时间，可选择倍率较低的摄影目镜或感光度较高的摄影胶片如ASA200以上或DIN24以上。
荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要，由于荧光很易褪色减弱，要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。因紫外光对荧光猝灭作用大，如FITC的标记物，在紫外光下照射30s，荧光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。
7、荧光图像的记录方法
荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上是可靠的。
8、荧光显微镜使用结束，关闭所有电源，做好镜头和载物台的清洁工作，待灯室冷却至室温后，用防尘罩盖好显微镜，并做好使用记录。
荧光显微镜使用注意事项
1、严格按照荧光显微镜说明书要求进行操作，不要随意改变程序。
2、荧光显微镜应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。
3、防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。
4、检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱;标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱;所以，Z多不得超过2～3h。
5、荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
6、标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。
7、荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“-”表示无或可见微弱荧光。“+”表示仅能见明确可见的荧光。“++”表示可见有明亮的荧光。“+++”表示可见耀眼的荧光。
2. 不同滤光片的作用与效果
滤光片主要用来过滤我们所需要的特定波长的光线。
人眼可见光波的范围大概在400nm～700nm之间，根据个体差异会有偏差。手机摄像头的红外滤光片IR就用来滤掉700nm之外的红外光，将700nm以内的可见光送入ISP做图像后期处理，如果不加红外滤光片，那么红外光也会参与到ISP的计算当中，影响计算结果。
在特定的夜视场景下，增加红外带通滤光片，滤除可见光，对后续图像分析如人脸识别等也具有重要意义。
3. 折射滤光片
7~10--um。
传感器可通过光的波长范围为7~10--um，正好适合于人体红外辐射的探测，而对其它波长的红外线由滤光片予以吸收，这样便形成了一种专门用作探测人体辐射的红外线传感器。
红外线传感器就是利用红外线的物理性质来进行测量的传感器。红外线又被叫做红外光，它包含有反射、折射、散射、干涉、吸收等性质。红外传感器的这种性质使得它有着广泛的应用。这当中有一种作用就是安装在门外监控门外的动静。
4. 反射滤光片与透射滤光片差异大吗
荧光显微镜(LWD300-38LFT，LW300LFT)的滤光片不止两种。种类有以下几种及其作用:
1. 吸热滤光片吸热滤光片是防止光源光谱中的热辐射线损伤光具组所必需的滤光片。
2.激发光滤光片激发光滤光片可以选择性吸收长波谱线而吸通透紫外线，紫色，蓝色和绿色光线的滤光片为激发滤色片。
3.阻挡滤光片阻挡滤光片是选择性吸收短波谱线和红外线而通透较长波长可视线的滤光片，其功能是使观察都能看到被检物体所激发出来的荧光，同时保护观察都的角膜免遭紫外线伤害4.色光分离滤光片色光分离滤光片是将激发光反射到被检物体上，使被检物体激发出荧光，再将荧光透射到目镜的滤光反射镜。这类滤我片只能用于落射光聚光器中，而透射光荧光显微镜不需要色光分离。5.干涉滤光片干涉滤光片是高性能激发滤光片的一种。它是将数张薄层金属膜叠放在抛光的两张玻璃片之间制成的滤光片。每张薄金属膜的折光系数都不相同，因此照明光源的各种不同波长的谱线在每张金属膜上反复进行反射，使得某些波长的谱线因相消干涉而抵消，另一些波长的谱线相加干涉而得以加强，并透射过去，这样得到透射波谱很窄、半波峰宽度只有6-20nm，透光度可达到60%-70%的滤光片。
5. 反射滤光片与透射滤光片差异原因
能够使光线有选择地分成反射和透射两部分的干涉滤光片的总称。根据分光膜种类不同,对光的选择形式也不同,有不分波段的半透射半反射膜,有选择一定波段光透射其余波段反射的带通滤光片,有偏振分光片等等。分光方式又可分成单级和多级。在感光测定、照相机自动测光系统、分光彩色摄影等方面有广泛应用。
6. 吸收反射复合型滤光片
能从紫外到红外任意波长﹑λ为 1～500埃的各种干涉滤光片。金属－介质膜滤光片的峰值透射率不如全介质膜高，但后者的次峰和旁带问题较严重。薄膜干涉滤光片中还有一种圆形或长条形可变干涉滤光片，适宜于空间天文测量。此外，还有一种双色滤光片，它与入射光束成45°角放置，能以高而均匀的反射和透射率将光束分解为方向互相垂直的两种不同颜色的光，适合于多通道多色测光。干涉滤光片一般要求垂直入射，当入射角增大时，向短波方向移动。
这个特点在一定范围内可用来调准中心波长。由于、λ和峰值透过率均随温度和时间而显著变化﹐使用窄带滤光片时必须十分小心。由于大尺寸的均匀膜层难于获得﹐干涉滤光片的直径一般都小于50毫米。有人曾用拼合方法获得大到38厘米见方的干涉滤光片﹐装在英国口径 1.2米施密特望远镜上﹐用于拍摄大面积星云的单色像。