1. 蛋白质测定所需要的仪器与设备是什么
即激活全血凝固时间)监测仪,是目前国内外在临床血液体外循环手术时,监测血凝时间的一种客观、有效的方法。
该仪器可用于心脏手术血液体外循环时,“ACT”值的测定以及在搭桥手术,PTCA、ICU/CCU、ECMO、血滤、血管造型术患者的溶栓以及肝素治疗时的“ACT”值的测定。
通过ACT值的测定,以此可以确定血液所需肝素抗凝及鱼精蛋白拮抗的计量,是确保心脏等手术安全和成功的有效手段之一。
2. 蛋白质测定仪使用方法
现在有很多蛋白快速检测仪就是使用近红外光谱检测蛋白的,不过饲料原料的细度对近红外检测蛋白有显著影响,所以饲料原料在检测前最好粉碎细度40目以上检测结果才比较准确。
3. 常用的蛋白质测定方法有哪些
蛋白质印迹(免疫印迹试验)即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息
蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所(Friedrich Miescher Institute)Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981所著《析物化》(Analytical Biochemistry)首称Western Blot蛋白免疫印迹(Western Blot)电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面
4. 蛋白质测定所需要的仪器与设备是什么意思
常用的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。
其中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛,现将其与其他的蛋白质染色方法(主要是银染法)作一比较,帮助大家更好地去选择合适的蛋白质染色方法。
蛋白质的染色常用的有4类:有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。
其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法(Coomasie brilliant blue,CBB)为代表,在蛋白质分析中常用,但对低丰度蛋白质的显现较差;银染灵敏度虽高,却常与质谱不兼容;荧光染色以SYPRO试剂为主,蛋白质检测灵敏度高,能兼容质谱,但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵,未被作为常规方法使用;而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。
因此,筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。
由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用,近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进,方法众多,评价不一。
我们在作双向凝胶电泳时,将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较,并就其染色影响因素作出分析。……详细资料请参考:on http://www.bio1000.com/experiment/protein/351913.html
5. 检测蛋白质的仪器叫什么
蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。
在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质通过范德华键结合后,变为蓝色,且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律,可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈最大光吸收,至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速,消耗样品量少,但不同蛋白质之间差异大,且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时,改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强,比色杯不洗干净会影响光吸收值,不可用石英怀测定
6. 蛋白质测定可以采用什么方法
WB实验的基本原理:
蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除 ELISA 法外,也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。
与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
三、WB实验步骤
(一)试剂准备
(二)蛋白样品制备
(三) 蛋白含量的测定
(四)SDS-PAGE电泳
(五)转膜
(六)免疫反应
(七)化学发光,显影,定影
(八)凝胶图象分析
7. 蛋白质的测定方法有哪些
粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物,后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。然而,不同蛋白质的氨基酸组成不同,其氮含量不同,总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之,粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量,测量步骤如:蛋白质含氮量约为16%(这已通过多次试验得出),再用凯氏法测出总氮量,再乘以6.25就可求得粗蛋白的含量。
8. 测量蛋白质的仪器
●方法:平板等电聚焦
●原理:蛋白质分子在含有载体两性电介质形成的连续而稳定的线性pH梯度中进行电泳。但不自是按照等电点不同被分离。
●仪器:Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell
●样品要求:
●液体:浓度>3mg/ml;体积>200ul;固体:质量>200ug
●样品纯度>90%;含盐量<3 0mM;分子量:一般要求大于1000Da
●常见影响测试情况:
1、蛋白质纯度不足
2、含盐量过高
3、蛋白质分子量太小,导致无法固定染色
9. 蛋白质测定所需要的仪器与设备是什么样的
紫外分光光度法测定蛋白质含量。