1. 发射滤光片和激发滤光片
DuRed
DuRed(10.000 in Water)同GelRed一样 代替EB染料DuRed 核酸染料。
正文
DuRed(10.000 in Water)同GelRed一样 代替EB染料DuRed 核酸染料(10,000× 水溶液)DuRed核酸染料特点 ● 无毒性:DuRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。
● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
● 稳定性高:适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。
● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
● 操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
● 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。但是DuRed不能被488 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。对于此类装置,我们推荐您使用DuGreen(Cat#S1006),它和SYBR Green I的光谱相似,灵敏度相当,但更加稳定。
DuRed使用方法简介 1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)
(1)制胶时加入DuRed 核酸染料(例如:每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL DuRed 10,000× 储液,
2. 滤光片的使用
tes1332a照度计使用方法:
1.
打开电源,选择适合测量档位。
2.
打开光检测器头盖,并将光检测器放在欲测光源之水平位置。
3.
读取照度计 LCD 测量值。
4.
如果是左侧最高位数显示“1”,表示过载,应选择较高档位测量。
照度计(或称勒克斯计)是一种专门测量照度的仪器仪表。就是测量物体被照明的程度,也即物体表面所得到的光通量与被照面积之比。照度计通常是由硒光电池或硅光电池配合滤光片和微安表组成。
3. 激发滤光片的作用
由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光.
不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱;,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
4. 滤光片和滤波片
摄像机工作原理
外部光线穿过镜头(lens)后, 经过滤光片(color filter)滤波后照射到光学传感器(Sensor)上面, Sensor 将从 lens 上传导过来的光线转换为电信号,再通过内部的 AD 转换为数字信号。
如果 Sensor 没有集成 DSP,则通过 DVP 的方式传输到 baseband,此时的数据格式是原数据(RAW DATA);
如果集成 了 DSP, RAW DATA 数据经过自动白平衡(AWB)、颜色矩阵(color matrix)、镜头校正(lens shading)、 gamma、 锐度调节(sharpness)、 自动曝光(AE) 和 降噪处理(de-noise)处理,后输出 YUV 或者 RGB 格式的数据,最后会由 CPU 送到显卡的framebuffer 中进行显示,这样我们就看到 camera 拍摄到的景象了。
5. 怎么选择激发滤光片和荧光滤光片
紫色激光器荧光染料 405 nm 激发。适用于丰度较高的抗原。
绿色和黄绿色激光器的荧光染料 532 561 nm 激发。用于配有合适的滤光片通道的流式细胞仪光耐受强并且不依赖于PH值,是荧光显微镜技术的最佳选择
蓝光激光器荧光染料 488 nm 激发。适用于荧光显微镜技术。
红光激光器荧光染料 633 nm 激发。适用于配备氦氖激光器或红色二极管激光器的流式细胞仪。
6. 激发滤光片和阻断滤光片
应当是三片滤光片吧,不止两片。
主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。 荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光光源——般采用超高压汞灯(50一200W),它可发出各种波长的光,但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长,所以需加用激发滤片(一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片),仅使一定波长的激发光透过照射到标本上,而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后,在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性,一般都比激发光弱,为能观察到专一的荧光,在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有二:一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛?二是选择并让特异的荧光透过,表现出专一的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用
7. 发射滤光片和激发滤光片一样吗
1、用窗帘遮蔽光线,关闭房间内的电灯,除去荧光显微镜的防尘罩,确保荧光显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱,并转动灯箱卡圈上的拨杆,将灯箱与镜臂连接。
2、将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座,再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。
3、打开荧光显微镜电源开关,电压表显示出电源电压,如电源电压波动不大于额定电压值的5%,即可按下启动开关点燃汞灯,如因天气太冷或电压不稳定等原因,一次启动未点燃汞灯,可以多按几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到Zda发光效率,即可开始工作。
4、灯泡的调中:
①任选一块标本放在荧光显微镜载物台上。
②转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路,转动滤色片组转换手轮,将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路,并将25荧光物镜转入光路。
③调节粗微调手轮,将标本像调焦清晰。
④前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆,使视场光栏成像清晰,转动视场光栏拨杆将视场光栏收小,调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中,然后再将视场光栏开至Zda。
⑤转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路,前后调节灯箱上的聚光镜拨杆,使汞灯的弧光在视场内成像清晰。
⑥调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使汞灯的弧光居中。
⑦调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使光源的反射像与汞灯的弧光分开。
⑧转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路,此时视场照明均匀。
5、荧光观察:
①将荧光染色标本放到荧光显微镜载物台上。
②将10x平场物镜或25x荧光物镜转入光路,调节载物台纵横移动手轮,将标本移入光路。
③转动滤光片转换拨轮,将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。滤光片选择正确与否,是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时,必须遵守斯托克斯定律:激发滤光片的透射波长<双色束分离器的透射波长<阻断滤光片的透射波长。
④调节粗调手轮,当看清荧光图像轮廓后,再用微调手轮调焦,直至看到清晰的荧光图像。
⑤当需要得到较强的荧光图像时,可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路,可获得较明亮的荧光图像。
⑥当需要使用40x或100x荧光物镜观察时,应在标本和物镜间加上甘油,油中不能有影响观察的小泡或杂质。使用时可使甘油慢慢浸润一会儿,然后轻轻左右来回转动物镜转换器以排除气泡。
6、荧光显微摄影
由于荧光图像一般均较明场观察暗得多,所以进行荧光显微摄影需要较长的曝光时间,在曝光时应注意避免荧光显微镜震动。为了缩短曝光时间,可选择倍率较低的摄影目镜或感光度较高的摄影胶片如ASA200以上或DIN24以上。
荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要,由于荧光很易褪色减弱,要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。因紫外光对荧光猝灭作用大,如FITC的标记物,在紫外光下照射30s,荧光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。
7、荧光图像的记录方法
荧光显微镜所看到的荧光图像,一是具有形态学特征,二是具有荧光的颜色和亮度,在判断结果时,必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标,即凭工作者目力观察。作为一般定性观察,基本上是可靠的。
8、荧光显微镜使用结束,关闭所有电源,做好镜头和载物台的清洁工作,待灯室冷却至室温后,用防尘罩盖好显微镜,并做好使用记录。
荧光显微镜使用注意事项
1、严格按照荧光显微镜说明书要求进行操作,不要随意改变程序。
2、荧光显微镜应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗室,再开始观察标本。
3、防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。
4、检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱;所以,Z多不得超过2~3h。
5、荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时,须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
6、标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发。
7、荧光亮度的判断标准:一般分为四级,即“-”表示无或可见微弱荧光。“+”表示仅能见明确可见的荧光。“++”表示可见有明亮的荧光。“+++”表示可见耀眼的荧光。
8. 发射滤光片和激发滤光片的区别
需要确定你的激光滤光片和透射滤光片的波长,这个一般成套使用。常用的激发光EX(Exciation):紫外,UV,365nm蓝光,B,450nm,455,460,470,绿光,G,510,525,530,546,555,564,570nm.EM(Emission)波段相应的要长过EX波段。
9. 激光滤波片
其工作电路分为主电路和控制电路。
1)主电路工作原理:
电源滤波器和整流电路:里面包含电源射频滤波器和高压对地放点保护。电源射频滤波器的作用是抑制激光电源运行时,对电网的射频传导干扰进行抑制。高压对地放电保护的作用就是放电保护。
DC/AC变换器:利用电磁感应等原理,实现交流电转变成特定电压的直流电。
高压包:高压包在变换电路里能有效一直尖峰电压,避免晶体管集、射极间的电压超限,确保工作过程中的稳定可靠。
驱动电路:驱动电路可以理解为变压器输出的推挽式开关放大器,当输入端没有处罚电压信号时,晶体管基极电压低于射极,晶体管截止。当一个晶体管基极出现电平时,晶体管导通。线路协同工作,以提供稳定可靠性。
3、辅助电源电路:+12V电源、+5V电源和之后+12V电源。
4、脉宽调制电路:脉宽输出端、截止控制、脉宽控制、过流保护。
5、高压输出端开路保护:高压负极采样、保护过程、恢复。
6、操作控制电路:水保护、低电平开光触发、高电平开光触发、光功率控制和实验按钮。
激光电源前端连接外部电源,后端连接激光器光学配件及激光器控制,起到的作用就是将外部电源转换成激光器可用的稳定可控的直流电源。这篇文章就介绍一下激光电源的主要结构,这些结构之间是如何协调工作,输出稳定可控直流电流的。
10. 波长滤光片
滤光片是用来选取所需辐射波段的光学器件,是一种不仅能衰减光强度,还可以改变光谱成分或限定振动面的光学零件。产品广泛应用于:红外测温,红外热成像,光纤通信用、工业激光、自动化设备、半导体生产、微测量系统、建筑测绘、生物识别、医疗仪器器械、安防监控、美容仪器、舞台灯光、高能激光设备、军工设备、红外成像、视觉光源、生化分析仪、酶标仪、指纹识别、虹膜识别、微投与成像统等领域。
滤光片是用来选取所需辐射波段的光学器件。滤光片的一个共性,就是没有任何滤光片能让天体的成像变得更明亮,因为所有的滤光片都会吸收某些波长,从而使物体变得更暗。