蛋白质等电点检测(蛋白质等电点测量)

海潮机械 2023-01-16 23:51 编辑:admin 292阅读

1. 蛋白质等电点测量

等电点最重要的应用就是离子交换色谱分离蛋白质。蛋白质由许多包含弱酸弱碱集团的不同氨基酸组成。它们表面的净电荷会随着周围环境的pH值改变而改变。对某一特定蛋白质来说,其表面净电荷与pH之间的相对关系是独特的,而离子交换层析色谱正是利用了这一特点来完成对不同蛋白质的分离。当蛋白质等电点与pH值一致时,表面净电荷为零,此时不结合填料。当环境pH值高于等电点时,蛋白质表面净电荷为负值,与带正电荷的填料结合,也就是阴离子交换层析色谱。反之当环境pH值低于等电点时,蛋白质表面净电荷为正值,与带负电荷的填料结合,也就是阳离子交换层析色谱。

2. 蛋白质等电点的测定的实验结果

交错分配法.

对一种特定的蛋白质,在不同盐系统中,pH和其分配系数之间的关系应不同,而在等电点时,得到的均为不带电时分子的分配系数.对不同的盐系统,其等电点时的分配系数应相等,两条pH和分配系数关系的曲线必交于一点,该点所对应的pH值即为该特定蛋白质的等电点.根据这一原则测定蛋白质等电点的方法,称为交错分配法。

3. 蛋白质等电点测量方法

等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。

4. 蛋白质等电点测定结果

等电点的名词解释为,等电点(pI)是一个分子或者表面不带电荷时的pH值。

1、等电点是两性电解质所带电荷因溶液的pH值不同而改变,当两性电解质正负电荷数值相等时,溶液的pH值即称为该物质的等电点,蛋白质是两性电解质,其等电点和它所含的酸性氨基酸和碱性氨基酸的数量比例有关。

2、氢离子浓度指数是指溶液中氢离子的总数和总物质的量的比,一般称为pH,而不是pH值,p意思是浓度,H代表氢离子,氢离子活度指数的测定定性方法可通过使用pH指示剂、pH试纸测定,而定量的pH测量需要采用pH计来进行测定。

3、两性离子是总电荷为0,电中性的化合物,但是带正电和负电的原子不同,有些化学家将此术语限定为未具有相邻正负电荷的化合物,此定义将诸如氧化胺的化合物排出,两性离子为极性通常易溶于水,难溶于大部分有机溶剂。

5. 测蛋白质等电点的方法

蛋白沉淀法有等电点沉淀法和盐析

一、等电点沉淀法

等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。

在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。

等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。

二、盐析

盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐,随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。中性盐是强电解质,溶解度又大,在蛋白质溶液中,一方面与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出。

向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质性质发生改变而凝聚,进而从溶液中析出,这种作用叫作变性,性质改变,是化学反应,无法复原。

把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热,反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物(胶体)。往锅内加入食盐颗粒,搅拌、静置,使高级脂肪酸钠与甘油、水分离,浮在液面。

6. 蛋白质等电点测量结果发生较大误差

蛋白质之所以可以溶解在水中,原因有二:电荷和水化膜(类似与胶体存在)等电点是,蛋白质电荷为0,所以很容易沉淀,实际上总是利用这一点,或加很多盐来盐析

7. 蛋白质等电点的测定方法

1,在等电点附近,蛋白质溶液开始变浑浊,离心可见沉淀2,远离等电点,蛋白质溶液开始变澄清,离心未见沉淀