1. 超高分辨率荧光显微镜对化学
一、原理不同
1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。
2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。
二、特点不同
1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光。
2、激光共聚焦显微镜:利用计算机进行图象处理,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象,以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。
2. 高分辨率荧光显微镜包括
1.荧光显微镜,是在光镜水平上对细胞内特异的蛋白质、核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位研究的有力工具。
2.激光扫描共焦显微镜,成像清晰,分辨率高,在研究亚细胞结构与组分的定位及动态变化等方面的应用越来越广泛,荧光共振能量转移技术、荧光漂白恢复技术以及单分子成像技术等都离不开激光扫描共焦显微镜。
3.相差显微镜,不需要染色就可以观察活细胞以及细胞核、线粒体等细胞器的动态。
4.微分干涉显微镜,在相差显微镜的基础上发展而来,增加了样品密度的明暗区别,增加了反差,成像更具立体感,更适于研究活细胞。
5.暗视野显微镜,在黑暗背景下利用散射光观察细胞,细胞及细胞器边缘轮廓更清晰。
6.倒置显微镜,照射系统和物镜颠倒位置,增加了集光器和载物台的距离,可放置培养皿观察。
7.录像增差显微镜,分辨率比普通光学镜提高了一个数量级,可在高分辨率下研究活细胞,可观察颗粒的运动。
3. 超分辨荧光显微技术
①开启汞灯后,在荧光显微镜工作台上放一张白纸,并从物镜转换器中转出物镜,即转换器上出现的空孔位于光轴上,卸去转换器上保护盖(如无空孔,可卸掉一个低倍物镜,校准完毕后再旋上)。转动荧光显微镜主体内的滤光片座,选一个透过绿光的滤光片组,使反射照明有光通过物镜转换器孔,此时在白纸上可以看到汞灯照亮的光斑。如光斑太亮,可以插入中性滤光片,或带上太阳眼镜,以保护眼睛。
②转动聚光镜调焦旋手,使汞灯光弧在白纸上成像清晰。因汞灯室内装有一个球面反光镜,用来增加亮度,于是在白纸上看到两个光弧的像。旋转汞灯调节旋手和反光镜位置调节旋手,使两个光弧并立。再转动反光镜聚焦调节旋手,使两个光弧有接近相等的亮度。
③旋转汞灯调节旋手和反光镜位置调节旋手,使两个光弧重合。再调节聚光镜调焦旋手,得到放大和均匀的光弧像。这样汞灯校准工作就完成了。转入物镜后,根据物镜具体倍率,稍微调节一下聚光镜调焦旋手就可以了。
4. 荧光显微镜的分辨率比普通显微镜的分辨率高
荧光显微镜下你人眼是不是观察清楚了,是不是在暗室内观察拍照的,荧光光源是紫外光,要求在暗室内关灯观察拍照。如果目视下观察清楚的话,还拍不清,那你要考虑摄像头了,建议摄像头采用制冷 的,芯片采用CCD而不是CMOS的。
5. 超分辨荧光显微镜技术
需要用测微尺给显微镜定标, 建立一个标准类似比例尺 400倍就是1:400 40就是1:40
6. 关于光学显微镜的分辨率
这个是根据人眼睛的分辨率来决定的
人眼的最高分辨率是0.2mm
而光学显微镜的放大倍数在1000 再大的话图像时虚的,物镜决定图像质量
所以综合以后 光学显微镜的分辨率最高为200nm
目镜的话一般选择10倍的,当然也有更大的,12.5,16,20,
甚至进口仪器还有25倍的 但是在仪器上我们所看到的图像不是原来真实的图像了,而是一个虚像。
7. 超高分辨率荧光显微镜对化学的影响
那是因为激发,阻挡两组片子有问题~~他们通过的光波波长很大的影响~~ 还有就是根据我的经验告诉我 如果你的荧光产品配的是LED光源那么你观察物体的时候一定视野里底色就是黄色 这个问题要解决还需要很多地方观察 一两句不能说清楚的~~ 不知道你是那里? 在那里买的 你可以找你的销售人员和该公司的售后帮你解决~
8. 超分辨率荧光显微镜的分辨率计算
200纳米。(可见光的波长770~390纳米)光学显微镜的分辨率与照明光束的聚焦范围有密切联系。18世纪70年代,德国物理学家恩斯特.阿贝发现。 可见光由于其波动特性会发生衍射,因而光束不能无限聚焦。根据这个阿贝定律,可见光能聚焦的最小直径是光波波长的三分之一。 也就是200纳米。一个多世纪以来,200纳米的"阿贝极限"一直被认为是光学显微镜理论上的分辨率极限,小于这个尺寸的物体必须借助电子显微镜或隧道扫描显微镜才能观察。