1. 自动凯氏定氮法
凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔创建的一种常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等,是分析有机化合物含氮量的常用方法。
凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此,通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质),即: 蛋白质含量=含氮量/16%。 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法
2. 自动凯氏定氮法测定乳及乳制品中蛋白质的测定
优点:
1、可用于所有食品的蛋白质分析中。
2、操作相对比较简单。
3、实验费用较低。
4、结果准确,是一种测定蛋白质的经典方法。
5、用微量凯氏定氮法可测定样品中微量的蛋白质。
缺点:
1、最终测定的是总有机氮,而不只是蛋白质氮。
2、实验时间太长,至少需要2小时才能完成。
3、精度差,精度低于双缩脲法。
二、凯氏定氮法注意事项
1、样品应是均匀的,固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀。
2、样品放入定氮瓶内时,不要沾附颈上,万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低。
3、硝化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入百分之三十过氧化氢2到3毫升,促使氧化。
4、在整个消化过程中,不要用强火。保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失。
3. 自动凯氏定氮法和常规凯氏定氮法有什么区别
凯氏定氮法是通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量,此法的结果称为粗蛋白质含量。
原理:有机含氮化合物与浓硫酸共热消化,氮转化为氨,再与硫酸结合成硫酸铵。硫酸铵与强碱反应,放出氨。将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中,再用标准碱溶液进行滴定。根据测得的氨量,计算样品的总氮量。、试剂与材料:浓硫酸、硫酸钾-硫酸铜粉末(称取80g硫酸钾和20g硫酸铜(五水),0.3g二氧化硒研细混合)、30%氢氧化钠溶液、2%硼酸溶液、0.01M标准盐酸、混合指示剂(田氏指示剂)储存液(取50ml0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1%甲基红溶液混合,储存于棕色瓶中备用。
克氏定氮法 :天然含氮有机化合物(如蛋白质)与浓硫酸共热时分解出氨,氨与硫酸反应生成硫酸铵。在克氏定氮仪中加入强碱碱化消化液,使硫酸铵分解出氨。用水蒸气蒸馏法将氨蒸入硼酸溶液中,然后再用标准稀硫酸酸溶液进行滴定,滴定所用稀硫酸酸的量(mol)相当于被测样品中氨的量(mol),根据所测得的氨量即可计算样品的含氮量。
原理是因为蛋白质含氮量通常在16%左右,所以将克氏定氮法测得的含氮量乘上系数6.25,便得到该样品的蛋白质含量。
4. 自动凯氏定氮法参数
主要是两个时间,第一个是消化时间,第二个是蒸馏时间,最后的滴定时间不长。一般需要4个小时,难消化的样品需要一天。
5. 自动凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告
奶制品中的蛋白质含量的测定方法分为两大类:
一类是利用蛋白质的共性,即含氮量,肽链和紫外吸收测定蛋白质含量;
另一类是利用蛋白质中的特定氨基酸残基以及酸、碱性基团和芳香基团测定蛋白质含量。
由于食品种类很多,食品中蛋白质含量又各不相同,特别是其他成分,如碳水化合物,脂肪和维生素的干扰成分很多。而凯氏定氮法因其通用性强,测定费用低,仪器简单,且比较准确。因此常用凯氏定氮法来测定食品中的氮含量,再由氮含量计算出蛋白质的含量。
目前我国食品中蛋白质含量测定的国家标准就是通过凯氏定氮法来测定的。在检验食品中蛋白质时,往往只限于测定总氮量,然后乘以氮换算为蛋白质的系数,得到蛋白质含量,实际上这样测定的蛋白质含量包括核酸生物碱、含氮类脂、卟啉和含氮色素等非蛋白质含氮化合物,故称为粗蛋白质。
凯氏定氮法实际上测的不是蛋白质含量,而是通过测氮含量来推算蛋白质的含量。不法商人就是利用了这一点,通过向奶制品中加入高含氮量的有机化合物三聚氰胺来提高其产品的“蛋白”含量的。
在正常情况下,对于食品,特别是奶制品中蛋白质含量测定,这个测定方法是没有问题的,因为食品,特别是奶制品中的主要成分中只有蛋白质含有氮,其他主要成分脂肪以及碳水化合物都不含氮。因此,应该说目前食品中蛋白质含量测定的国家标准采用凯氏定氮法,通过测定食品中总含氮量来计算蛋白质含量的方法在理论上并没有错。
但是,如果有人往样品中加入高含氮的其他物质,如三聚氰胺,就可以骗过凯氏定氮法获得虚假的蛋白质高含量。这样,就可以通过向原奶中兑水,把水当作牛奶来卖;向奶粉中添加淀粉等,将淀粉等当作奶粉,甚至婴幼儿配方奶粉来出售。面对这一问题,仅通过建立食品、特别是乳制品中三聚氰胺的检测方法是不够的,因为不法分子为了商业利益可能还会“研发”其他高含氮化合物作为新的“蛋白精”来替代受到高度关注的三聚氰胺。
6. 自动凯氏定氮法,消化完了之后能放置一晚吗
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。
由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是在测定蛋白质定量的时候使用。