活细胞分选系统(单细胞分离系统)

1. 单细胞分离系统

自然界中几乎所有的微生物都混合在一起。

为了观察、研究和利用微生物，必须将其与各种微生物的环境相分离。因此，微生物分离是一项非常重要的技术。微生物分离的基本方法之一，有很多方法，有连续稀释分离法、平板色谱分离法和单细胞分离法。其中，单细胞分离法要求昂贵的精密仪器，高中不能进行，而连续稀释分离法和板线分离法简单易行，完全有条件进行中学办学条件。这两种方法描述如下。1连续稀释分离法取1克土样，在火焰侧用无菌瓶灌满99毫克水，充分摇匀，细菌分散。用吸管吸取菌悬液1毫升，放入试管装无菌水9毫升，并进一步稀释成1000倍，即10-3悬浮。稀释10倍稀释法（稀释浓度为每1次，必须更换吸管）。取1毫升吸管，3毫升分别从10-8、10-7、10-6菌悬液吸收的悬浮液，1毫升分别为10-8数、10-7、10-6在培养皿中，也同样重复做3菜。温度为45℃～50℃的营养琼脂培养基（其组成和制备方法请参考第三章）入菜，轻轻旋转菌悬液充分混合，凝固后，这道菜是反放在温暖的地方（28摄氏度），每日观察培养基表面没有微生物菌落。经过一定时期培养培养基菌落生长后，根据菌落特性，初步判断微生物种类，并在显微镜下观察，如果形态一致，可以认为是初步分离纯培养。纯培养物的分离将由平板培养基转入试管、试管斜面培养基。2板线分离法取1克土样，在火焰附近用无菌瓶灌满99毫升无菌水，塞上棉花塞，制成悬浮菌。第二，取培养皿置于实验阶段，左手将培养皿打开，一盘营养注入固体溶化培养基10～12毫升，轻轻转动培养皿，培养基均匀分布，平放在台面上，胶结板。然后在锅底用蜡笔师A、B、C、D几个区域。连续生产多种平板培养。培养皿的底部用拇指和无名指固定在倾斜状态。同时，随着环接种针把小火在菌悬液，迅速成菜，盘子中，第一平行线6 ~ 7，旋转盘约70°的接种针烧冷却，通过第二平行交叉划线部分的第一次，然后用同样的方法第三平行线。划线时，应使基材表面平整，以免落入空气中。接种针应与钢板表面约30度。不要将针头暴露在培养皿的边缘，或切开培养基。该菜倒盘后在28度左右倒温处进行训练，将细菌生长后，鉴定微生物种群，并根据检测结果，确定是否分离出纯培养物。如果菌株很纯，可以转入斜面培养基进行进一步培养。连续稀释分离法和平板法，必须在无菌室进行或接种。二、从1种土壤中分离出的各种微生物好氧兼兼性厌氧菌的分离方法见“分离”的2种基本方法从土壤中产生的放线菌分离出高达1的培养基，同时热入菜盘、胶结板、预留。取10克土，放入瓶中含无菌水约100毫升的锥，并加入10%滴酚10滴以抑制细菌的生长。10分钟振荡，使10-1悬浮。根据连续稀释分离法，进一步制备了10-3菌悬液。用吸管吸取0.1毫升10-3悬挂，并将其插入到平板培养基，然后用无菌玻璃刮刀均匀的菌悬液在整个培养基。培养皿在25～30℃的培养箱中翻转，为期7～10天。如果菌落硬度大，干燥致密，与基质紧密相连，而不是EA

2. 白细胞分离技术

我用一种叫buffycoat的东西分离PBMC，应该就是你说的取走血浆的血细胞了。看上去就非常的稠，静置一会就会分层，上层是淡黄色的，感觉像是血细胞，下层还是深红色。

我的方法是用这种液体稀释四倍后铺在ficoll上梯度离心，和全血一样。铺的时候没有全血好铺，感觉很容易和ficoll混起来，不像全血是‘飘’在ficoll上面的。分离后会看到一层特别特别厚的PBMC，厚到有的时候他们沾在一起一大团。16ml的这种buffycoat我每次能提出100-300*10^6个PBMC来。

我用miltenye的柱子分离t细胞效果很好。

3. 单细胞分离器

　　1、海水鱼需要很完善的过滤系统(物理过滤和生物过滤);新缸的物理过滤需要吸氨石，各种瓷环等滤材;生物过滤需要硝化细菌和海藻;生物滤床建立的时间需要2-3个月，如果添加大量的硝化细菌，时间会缩短。在两种过滤没有建立之前，放进任何生物都不会存活太久的时间。

　　2、如果你喜欢珊瑚造景缸，千万不能买蝶鱼，狗头，鹦哥之类的品种，会吃光你的珊瑚的;小型鱼不能和大型食肉鱼在一起养殖。如狮子鱼和很多隆头鱼;总之，要避免种类之间的冲突。

　　3、定期换水，建议每2个月更换20%的海水;并定期添加微量元素;在养鱼后的2个月开始使用蛋白分离器;海水是硬水，定期检测亚硝酸盐的浓度和PH的稳定。

　　养海鱼的海水特性

　　海水是与淡水完全不同的两种水质，它不但表现在水的化学特性不同，还表现在动与静的差别。海水潮起潮落，永无休止。海水观赏鱼很难在淡水中生活，淡水观赏鱼也很难在海水中生活，因此海水观赏鱼饲养的前提，是充分了解海水的特性。

　　(1)水温：海水观赏鱼对水温的要求较淡水热带鱼要高，它们对水温的变化很敏感，所能适应的温度变化范围很窄。天然海水的水温多在25—28℃，水温日温差的变化很小。水族箱中的海水水温应控制在 27—28℃，水温日温差应控制在1℃左右。在海水观赏鱼水族箱中，同时饲养有活体珊瑚，海葵等无脊椎动物，它们的生长水温为26—30℃，如果水温高于30℃，无脊椎动物的生命受到影响，如果水温低于25℃时，无脊椎动物的活力减弱，也会影响到海水鱼的健康，因此海水水温的稳定，是饲养好海水观赏鱼的前提。

　　(2)盐度和比重：盐度是指单位体积中所含盐分的数量，不同地域的海水，不同水温的海水，盐度是不同的。比重是指海水的密度除以蒸馏水的密度。由于蒸馏水的密度等于1，所以海水的比重永远大于1。海水的盐度和比重，在不同的水温中，数值是变化的。如在珊瑚礁海域，在水温25℃时，测得天然海水的比重介于1.022—1.023间，天然海水的盐度介于3.3—3.5%间。所以水族箱中饲养海水观赏鱼时，海水的比重应控制在1.022—1.023，海水的盐度应控制在3.3—3.5%间。实际上，海水的盐度是很难测定的，它是通过液体比重计和导电度计的数值推算出来的。导电度法是使用电导仪测定海水中的带电离子的数量，以此来推断海水的盐度，但在实际饲养中应用较少。比重法是依据海水的密度与纯水的比值来推算海水的盐度，它在海水观赏鱼的饲养中应用较普遍。测试时要注意当时的水温，只有在同一水温测得的数值才可以比较，这样控制了海水比重的稳定，也就是控制了海水盐度的变化。

　　(3)酸碱度(PH)：海水的碱性较强，天然海水的PH值经常稳定在 7.9—8.4之间。海水观赏鱼对水质 PH要求较高，因此水族箱中的海水 PH应维持在8.0—8.5之间。水族箱中饲养海水鱼后，海水的P H是经常变化的。当海水的PH降至8.0时，表示海水的缓冲能力正在下降，它会直接影响到海水鱼的正常活动，应及时在水中补充C02。补充C02的方法，可采用专用的C02反应生成器。

　　(4)硬度：海水的硬度是由水中所含的钙离子和镁离子的多少来决定的。天然海水的硬度多维持在 7—9dH。在水族箱中，海水的硬度应控制在7‘—9‘dH。海水的硬度是经常变化的，当水族箱中的海水硬度下降到5‘—6‘dH时，表示海水中CO2的数量正在减少，海水中的钙离子数量正在减少。海水的硬度可采用专用的药水测得。在水族箱中，海水的P H值的稳定在很大程度上依赖于海水硬度的稳定，也就是说水族箱中的海水，PH值和硬度之间存在一个动态的缓冲平衡系统。

　　C02溶解于水中，它是以H离子和 Hco3形式存在的。海水中无脊椎动物珊瑚等身上共生的单细胞虫黄藻，在生长时需要大量的C02，当水中 C02不足时，水中的Ca离子和Hco3就会结合形成白色不溶于水的碳酸钙和C02气体，这样海水中的H离子数量不断增加，表现为海水中的PH值不断下降。海水中的钙离子数量不断减少，表现为海水的硬度正在下降。当往海水中补充C02时，C02可将白色不溶于水的碳酸钙溶解，并不断地溶解于水中，这样海水中的Ca离子和 H离子数量不断增多，表现为海水的硬度和PH值回升，这就是水族箱中的海水的缓冲系统。只要海水的硬度稳定在7’—9‘dH，海水的PH值也会相应地稳定在8.0—8.5之间。

　　(5)亚硝酸盐：亚硝酸盐是海水中的一种有害化学物质，它是由残饵、鱼体的排泄物的腐败引起的。海水中亚硝酸盐的含量应控制在0.3毫克/升以下。如果亚硝酸盐的含量超过0.5毫克/升时，水族箱中的海水鱼和其他无脊椎动物的生命就会受到威胁。海水中的亚硝酸盐是通过生物过滤系统来有效去除的。海水中的脱氨菌和硝化细菌将亚硝酸盐转化为无害的硝酸盐。水族箱中的硝酸盐含量应控制在5毫克/升以下。

　　(6)铁：海水中铁的含量应维持在0.01—0.1毫克/升。铁质不仅是珊瑚中共生的单细胞虫黄藻的营养盐，同时也是海水鱼、无脊椎动物体色鲜艳的营养物质。当水中铁的含量过低时，水族箱中的藻类和无脊椎动物的体色就会变淡。一般来说，当铁的含量低于0.01毫克/升时，应及时补充液态铁，保持海水水质的稳定和无脊椎动物的正常生长。

　　(7)硅酸盐：海水中硅的含量应低于5毫克/升。硅的含量越高，海水中的褐藻生长就越旺盛。石英砂的主要成分是二氧化硅，因此水族箱中的底砂应尽量不选用含硅丰富的石英砂。为了控制褐藻的生长，就必须控制硅酸盐的含量。海水中硅酸盐、铁、亚硝酸盐等的含量，都可通过专业的化学药水来测得。

　　养海鱼的常识

　　海水鱼是生活在海洋中的鱼，因此，我们要饲养它，必须要有相关的设备，采取相关的措施，来摸拟大洋中的生活环境。

4. 单细胞分离技术

大分子物质不断的聚合、分离，最终出现了能够自我复制的大分子物质。这时就可以说这就是生命了。

然后这些最初的生命又经历了漫长的时间，它们之间慢慢的聚合、分离，最终出现了单细胞。

这是一个伟大的进步，也是关键的一步。因为就是现在的人类，也是由无数个单细胞组成的。之后的事，就可以说是水到渠成了。当然，这同样需要漫长的时间。但与之前产生单细胞所用的时间相比，少了很多了

5. 单细胞分离系统包括

ES细胞的分离方法： A: 免疫学方法 利用ES细胞所具有的特殊标记，借助荧光细胞分离器从单细胞悬液分离ES细胞。

6. 单细胞显微分离

真核微生物

真菌、显微藻类和原生动物

真核生物是一类细胞核具有核膜，能进行有丝分裂，细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等多种细胞器的生物。菌物界的真菌、黏菌，植物界中的显微藻类和动物界中的原生、后生动物等都是属于真核生物类的微生物，故称为真核微生物。[1]

中文名

真核微生物

外文名

Eukaryotic microbes

应用学科

环境工程微生物

适用领域

环境生态

特点

有核膜、进行有丝分裂

简介特点基本结构分类TA说

简介

凡是细胞核具有核膜，能进行有丝分裂，细胞质中存在线粒体、叶绿体等细胞器的微小生物，称为真核微生物。原生动物、微型后生动物、藻类、真菌均属于真核微生物。真核生物的细胞与原核生物的细胞相比，其形态更大、结构更为复杂、细胞器的功能更为专一。真核生物已发展出许多由膜包围着的细胞器，如内质网、高尔基体、溶酶体、微体、线粒体和叶绿体等，更重要的是真核细胞已进化出有核膜包裹着的完整的细胞核，其中存在着构造极其精巧的染色体，它的双链DNA长链与组蛋白及其他蛋白密切结合，更完善地执行生物的遗传功能。[2]

特点

①核发育完全（有核膜将细胞核和细胞质分开，两者有明显界限）。

②有高度分化的细胞器，如线粒体、中心体、高尔基体、内质网、溶酶体和叶绿体。

③进行有丝分裂。[3]

基本结构

真核细胞与原核细胞相比，个体更大，结构更复杂，显著特征是有明显的细胞核，还有一些由膜包裹的细胞器。有细胞壁的真核细胞其内部为原生质体，由细胞质膜包裹着，其中为细胞质和细胞核。细胞质是透明而黏稠的溶胶，由各种细胞器及其他物质组成。除细胞器以外的胶状溶液为细胞浆或称细胞基质。内含细胞骨架、各种酶、储藏物质等内含物。真核微生物主要包括真菌、显微藻类和原生动物等。[4]

分类

原生动物

原生动物是动物中最原始、最低等、结构最简单的单细胞动物。在动物学中被列入原生动物门。因其形体微小，长度在10～300 µm，需在光学显微镜下才能看到。它们在自然界中分布广泛，特别是海水、淡水中大量存在。水体中的原生动物是重要的浮游生物。在活性污泥处理废水中原生动物以吞食细菌为生，对净化污水起到重要的作用。

原生动物为单细胞，没有细胞壁，有分化的细胞器，有一个或多个细胞核有核膜。有独立生活的生命特征和生理功能，如摄食、营养、呼吸、排泄、生长、繁殖、运动以及对刺激的反应等。上述各种功能是由相应的细胞器执行的，如：胞口、胞咽、食物泡、吸管是摄食、消化、营养的细胞器；收集管、伸缩泡、胞肛是排泄的细胞器；鞭毛、纤毛、刚毛、伪足是运动和捕食的细胞器；眼点是感觉细胞器。有的细胞器执行多种功能，如伪足、鞭毛、纤毛、刚毛既能执行运动功能，又能执行摄食功能，甚至还有感觉功能。

真菌

真菌的细胞构造包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、核糖体、内质网、高尔基体、液泡等。

大多数真菌是由菌丝构成的菌丝体。真菌菌丝的宽度约5～10 µm，比细菌和放线菌大几倍到几十倍。真菌菌丝可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。无隔膜菌丝是长管状的单细胞菌丝，没有隔膜，内含多个核。大多数卵菌和接合菌的菌丝为无隔膜菌丝。有隔膜菌丝是有隔膜的多细胞菌丝，每个细胞含有一个或多个核。横隔膜上开着小孔，可让细胞质和细胞核自由流通，各细胞功能相同。子囊菌和担子菌的菌丝为有隔膜菌丝。

根据生理功能，真菌菌丝可分为营养菌丝和繁殖菌丝。营养菌丝是伸入培养基内摄取营养物质的菌丝。它有多种变态，以更好地吸收养分。常见的变态营养菌丝有匍匐菌丝、假根、吸器、菌环、菌网等。

显微藻类

藻类是单细胞或多细胞的真核微生物，通常是植物学研究的对象，但不同种类间个体大小和形态差别悬殊，许多要用显微镜才能观察，所以将显微藻类归作微生物研究的范畴。藻类细胞内含有各种色素，能进行光合作用，吸收CO2并释放O2，营光能自养或兼性光能自养生活。藻类多为水生类型，在陆地上亦分布广泛，土壤中的藻类主要有硅藻、绿藻和黄藻，是构成土壤生物群落的重要成分。[5]