1. 测定蛋白质纯度方法
在评价样品纯度之前,首-先需要鉴定待测杂质的类型,如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质,进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征)。
而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。 需要注意的是,上述说明中并没有要求描述杂质的性质。 纯化过程可能已将某一杂质的浓度降低到检测下限以下,但色谱峰中还有残留。 毫无疑问,表观纯度取决于所选择的测定方法及其灵敏度。 由于大多数分离方法都能够有效地去除非蛋白质类杂质,因此本文将主要介绍蛋白质样品中蛋白质类杂质的检测方法。 目前有一些高灵敏度的方法可用于检测样品中的杂质。 其中每种方法测定分子的一种特定物理特性。
2. 测定蛋白质纯度方法是
用标准的结晶牛血清清蛋白(BSA)或标准酪蛋白,配制成10mg/ml50%的标准蛋白溶液,可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要,标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。配制完成后贴好标签备用。
3. 蛋白质纯度鉴定的三种方法
你想:最开始的浓度假设是xug/mL那么取了1ml蛋白质溶液,稀释到了100ml,则浓度为x/100ug/mL再取0.6mL,加入0.4ml蒸馏水和5ml考马斯后,浓度为x/100*0.6/6故x/100*0.6/6=12.777那么x=12.777*100*6/0.6ug/mL
4. hplc测定蛋白质纯度
浓度的选择,也是尽可能选择⾼浓度,不然就是有杂质,你的机器也看不见,直接测定法还有直接滴定和对照品法以及内标法等。
2、间接测定
间接测定是⾸先知道它的杂质的含量是多少,我们再间接测定样品的含量。简单的说就是:
纯度=100%-杂质含量%
杂质通常包括⽔分、⽆机杂质(⽐如硫酸盐、氯化物等)、有机残留等。
5. 蛋白质测定的方法
蛋白质印迹(免疫印迹试验)即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息
蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所(Friedrich Miescher Institute)Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981所著《析物化》(Analytical Biochemistry)首称Western Blot蛋白免疫印迹(Western Blot)电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面