1. 微量分光光度计使用
当一束已知强度的单色入射光(I0) 通过溶液时,一部分光被溶液吸收(吸光强度Ia),另一部分则透过溶液(透光度强It)。吸光率等于透光率的负对数(A=-lgT)
一、原理不同
1、吸光光度法:吸光光度法是借助分光光度计测定溶液的吸光度,根据朗伯一比耳定律确定物质溶液的浓度。吸光光度法是比较有色溶液对某一波长光的吸收情况。
2、分光光度法:分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。
二、特点不同
1、吸光光度法:灵敏度高,准确度较高,简便、快速,应用广泛。
2、分光光度法:具有灵敏度高、操作简便、快速等优点,是生物化学实验中最常用的实验方法。
三、用途不同
1、吸光光度法:适用于微量组分的分析。
2、分光光度法:物质进行定性和定量的分析。
2. 微量分光光度计使用前用什么洗
特点:可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较,或通过确定最大吸收波长,或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。 用于定量时,在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度,并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。 应用范围包括:
①定量分析,广泛用于各种物料中微量、超微量和常量的无机和有机物质的测定。
②定性和结构分析,紫外吸收光谱还可用于推断空间阻碍效应、氢键的强度、互变异构、几何异构现象等。
③反应动力学研究,即研究反应物浓度随时间而变化的函数关系,测定反应速度和反应级数,探讨反应机理。
④研究溶液平衡,如测定络合物的组成,稳定常数、酸碱离解常数等。
3. 显微分光光度计
①几何光学显微镜:包括生物显微镜、落射光显微镜、倒置显微镜、金相显微镜、暗视野显
微镜等。
②物理光学显微镜:包括相差显微镜、偏光显微镜、干涉显微镜、相差偏振光显微镜、相差
干涉显微镜、相差荧光显微镜等。
③信息转换显微镜:包括荧光显微镜、显微分光光度计、图像分析显微镜、声学显微镜、照
相显微镜、电视显微镜等。
列举几种显微镜的用途:
a生物显微镜:一般来说显微镜可分大类为体视显微镜与生物显微镜。由于用途不同、要求不同,因而产生了许多分支,但基本原理还是一样的。偏光、相衬、透射和落射等等还是归属于生物显微镜。
b体视显微镜:又称解剖显微镜、实体显微镜和立体显微镜,是用途比较多的显微镜。
4. 微量分光光度计的原理
分光光度法的实验原理是: 1、光度法测定的条件:分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测定吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂的用量,介质的酸度、显色时温度、显色时间及干扰物质的消除方法等;测量吸光度的条件包括入射光波长的选择、吸光度范围和参比溶液等。 2、二氮杂菲-亚铁络合物:邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。在pH=2~9的条件下Fe2+离子与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色络合物,此络合物的lgK稳=21.3,摩尔吸光系数ε510=1.1×104 在显色前,首先用盐酸羟胺把Fe3+离子还原为Fe2+离子,其反应式如下: 2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl- 测定时,控制溶液酸度在pH=5左右较为适宜。酸度过高,反应进行较慢;酸度太低,则Fe2+离子水解,影响显色。 Bi3+,Cd2+,Hg2+,Ag+,Zn2+等离子与显色剂生成沉淀,Ca2+,Cu2+,Ni2+等离子与显色剂形成有色络合物。因此当这些离子共存时,应注意它们的干扰作用。
5. 微量分光光度计使用方法
1、打开仪器电源开关,开启比色皿暗箱盖,调节“0”电位器旋纽,使电表指针处于透光率(T)“0”位,预热约20分钟。
2、调节波长(λ)调节旋纽,选择需用的单色光波长。
3、调节灵敏度开关,选择适当的灵敏度。再用调“0”旋纽复校电表透光率“0”位。
4、将比色皿暗箱盖合上,将参比溶液(空白)推入光路,顺时针旋转“100%”电位器调节旋纽使电表指针处于透光率“100%”处。
5、按上述方式连续几次调整透光率“0”及“100”,直至不变,即可进行测定工作。
6、将校准溶液和待测溶液推入光路,读取校准溶液吸光度(A)值。
7、将待测溶液推入光路,读取待测溶液吸光度值。
8、根据校准溶液和待测溶液吸光度值及校准溶液浓度计算待测物浓度。
6. 微量分光光度计使用注意事项
盐酸羟胺是还原剂,目的是将三价铁全部还原成二价铁,然后和邻二氮菲进行显色反应。
7. 微光分光光度计
没有稠光釉,是缎光釉。指的是表面施有绸缎光泽效果釉料的釉面砖,釉面柔和、光滑细腻,有绸缎般的质感。由于属于釉面砖,且未经抛光自有微光效果,原装釉面层,泛有微微绸缎光泽,表面釉层厚实且无毛细孔,不易渗污,表面硬度和耐磨度与抛釉砖不相上下,光度最佳性能在8-18度之间。