1. 双缩脲试剂检测蛋白质含量
先加双缩尿试机A液(质量浓度为0.1g/mol NAOH溶液),震荡后加入B液(质量浓度为0.01g/mol CuSO4溶液)然后震荡摇匀
2. 蛋白质的检测双缩脲试剂
双缩脲试剂就是指能与具有两个以上肽键的化合物发生红紫色显色反应的试剂。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应。蛋白质中的肽键与双缩脲中的一个结构相似,双缩脲试剂本是与这个结构反应。
3. 双缩脲试剂检测蛋白质含量原理
双缩脲反应的原理双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物,这一反应称为双缩脲反应双缩脲反应主要涉及肽键、尿素中含有类似肽键的结构、可与铜离子产生紫红色的络合物双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液; 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。 双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。而尿素中不含蛋白质,所以尿素不能与双缩脲试剂反应
4. 双缩脲法测定血清总蛋白
掌握血清白蛋白和球蛋白测定的原理和方法,并用盐析法测定水产动物血清中白蛋白和球蛋白的含量。
血清中含有多种不同成分的蛋白质,主要为白蛋白和球蛋白。用盐析法沉淀血清中球蛋白,用双缩脲法测定上清液中白蛋白,同时测定血清总蛋白。血清球蛋白的量从两者的差值求得。
5. 双缩脲试剂检测蛋白质的操作过程
双缩脲试剂检测蛋白质原理是双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物,此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有很多和双缩脲结构相似的肽键,因此也能起双缩脲反应,形成红紫色络合物。
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时,试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度。
双缩脲法测定蛋白质的优缺点:
优点:双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质,操作简单、快捷。既适合手工操作,又适合自动化分析,重复性好、线性关系好,双缩脲试剂可以长期保存。
缺点:灵敏度差,测定范围窄,样品需要量大,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。
干扰测定的物质包括有:在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。
6. 双缩脲试剂检测蛋白质含量实验报告
用双缩脲试剂检验蛋白质,溶液变成紫色。
检验蛋白质的是双缩脲试剂,检测还原糖是斐林试剂,
而双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液;
双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
斐林试剂虽然甲液乙液的浓度与其AB液不同,也是由NaOH ,CuSO4 组成,
这样,两者的检验也会有一定的影响
7. 双缩脲试剂检测蛋白质含量计算
双缩脲试剂分为A液与B液。A为氢氧化钠,B为硫酸铜。双缩脲试剂与蛋白质反应的实质其实是与肽键反应。而肽键实际上是断开后与铜离子形成紫色复合物。该反应需在碱性环境下完成。但硫酸铜遇到大量碱会生成氢氧化铜沉淀。故仅仅滴加3~4滴硫酸铜溶液,以免蓝色的氢氧化铜盖住了紫色复合物的紫色导致观察失败。
8. 双缩脲试剂检测蛋白质含量注意事项
双缩脲试剂是要检验蛋白质的,蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物,还必须在碱性环境下才行所以要先营造碱性环境,再和自由移动的Cu2+反应才行