1. 光电比色计测定什么
分光光度法
在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长(λ)为横坐标,吸收强度(A)为纵坐标,就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法,称为分光光度法,也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法,称为紫外分光光度法;用可见光光源测定有色物质的方法,称为可见光光度法。它们与比色法一样,都以Beer-Lambert定律为基础。 上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区,可见光区,红外光区。
比色法
colorimetry
以可见光作光源,比较溶液颜色深浅度以测定所含有色物质浓度的方法。
以生成有色化合物的显色反应为基础,通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种定量分析的方法,开始于19世纪30~40年代。比色分析对显色反应的基本要求是:反应应具有较高的灵敏度和选择性,反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定,它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件,是比色分析的关键。
常用的比色法有两种:目视比色法和光电比色法,两种方法都是以朗伯-比尔定律(A=εbc)为基础。常用的目视比色法是标准系列法,即用不同量的待测物标准溶液在完全相同的一组比色管中,先按分析步骤显色,配成颜色逐渐递变的标准色阶。试样溶液也在完全相同条件下显色,和标准色阶作比较,目视找出色泽最相近的那一份标准,由其中所含标准溶液的量,计算确定试样中待测组分的含量。
光电比色法是在光电比色计上测量一系列标准溶液的吸光度,将吸光度对浓度作图,绘制工作曲线,然后根据待测组分溶液的吸光度在工作曲线上查得其浓度或含量。与目视比色法相比,光电比色法消除了主观误差,提高了测量准确度,而且可以通过选择滤光片来消除干扰,从而提高了选择性。但光电比色计采用钨灯光源和滤光片,只适用于可见光谱区和只能 得到一定波长范围的复合光 , 而不是单色光束,还有其他一些局限,使它无论在测量的准确度、灵敏度和应用范围上都不如紫外-可见分光光度计。20 世纪30~60年代,是比色法发展的旺盛时期,此后就逐渐为分光光度法所代替。
2. 光电比色计的使用及溶液浓度的测定
比色分析法是利用被测溶液本身的颜色,或加入试剂后呈现的颜色,用眼睛(或目测比色计)观察、比较溶液颜色深度,或用光电比色计进行测量以确定溶液中被测物质浓度的方法。比色法包括目视比色法和光电比色法。
3. 光电比色计和分光光度计
OD是optical density(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,
是检测方法里的专有名词,检测单位用OD值表示,OD=lg(1/trans),
其中trans为检测物的透光值。
光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,
同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。
测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。
不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,
可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;
该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析。
常用的波长范围为:(1)200~380nm的紫外光区,
(2)380~780nm的可见光区,
(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区。
所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、
红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,
所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。
4. 光电比色计实验报告
比色计是通过被测溶液与标准溶液颜色的比较,进行定量分析的仪器,是一种测量材料彩色特征的仪器。比色计主要用途是对所测材料的颜色、色调、色值进行测定及分析,可用于食油、塑料,纺织,食品,果酱,粮食,油脂,松香,香料,橡胶等物质颜色的测量。
比色计具有透射法测量和反射发测量方式,透射法适用于液体及透明有色材料的测量,反射法适用于非透明材料表面颜色的测量。比色计可以分为目视比色计和光电比色计两种。
5. 光电比色法的仪器
又称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律(Beer-Lambert Law)、布格-朗伯-比尔定律,是光吸收的基本定律,适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质,包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。比尔-朗伯定律是吸光光度法、比色分析法和光电比色法的定量基础。光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目 。
6. 光电比色计的使用
计
分光光度计是用不连续的波长采样反射物体或透射物体的一种测量仪器。由于不同物体分子的结构不同,对不同波长光线的吸收能力也不同,因此,每种物体都具有特定的吸收光谱。能从含有各种波长的混合光中,将每一种单色光分离出来,并测量其强度的仪器叫做分光光度计。
分光光度法是比色法的发展。比色法只限于在可见光区,分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。分光光度法则要求近于真正单色光,其光谱带宽最大不超过3-5nm,在紫外区可到1nm以下,来自棱镜或光栅,具有较高的精度。分光光度计?就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。分光光度计可分为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。