1. 分光光度计的使用
1、在实验开始前,应提前打开仪器预热,并配置好所需的溶液,对于已经配置好的溶液,在不用时放在4℃冰箱中保存,放置时间超过一星期的溶液要重新配制。
2、实验所用的样品池是四面透光的石英池,拿取的时候用手指掐住池体的上角部,不能接触到四个面,清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。
3、在测试样品时,注意荧光强度范围的设定不要太高,以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。
4、实验结束后,要及时的清理台面,处理废液,清洗和放置好样品池,将下次要用的溶液放回冰箱,并且按规定登记实验记录,养成良好的实验习惯。
2. 分光光度计的用途
可见光度计(又名可见分光光度计、分光光度计)开发出能够进行定量测量(标准曲线测量,可对物质进行浓度直读);上海美析仪器动力学测试(测出物质浓度随时间变化OD值的变化);光谱扫描(可以对某一种物质进行全波段扫描,分析物质的特征波长,判断实验过程的误差);还有可以进行DNA/蛋白质测试、总磷总氮测试、重金属测试、农药残留测试、食品安全检测、热力发电金属离子测试等等,广泛应用于食品、药品、电力、生物研究、教学科研、化学化工、质量监督、水质环保和商检等各大领域。V-1300型可见分光光度计,波长范围:320nm-1100nm,能满足不同物质的测试。
3. 722型分光光度计的使用
(1)预热仪器 将选择开关置于“T”,打开电源开关,使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳,不要连续光照,预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开,使光路切断。
(2)选定波长 根据实验要求,转动波长手轮,调至所需要的单色波长。
(3)固定灵敏度档 在能使空白溶液很好地调到“100%”的情况下,尽可能采用灵敏度较低的挡,使用时,首先调到“1”挡,灵敏度不够时再逐渐升高。但换挡改变灵敏度后,须重新校正“0%”和“100%”。选好的灵敏度,实验过程中不要再变动。
(4)调节T=0% 轻轻旋动“0%”旋钮,使数字显示为“00.0”(此时试样室是打开的)。
(5)调节T=100% 将盛蒸馏水(或空白溶液,或纯溶剂)的比色皿放入比色皿座架中的第一格内,并对准光路,把试样室盖子轻轻盖上,调节透过率“100%”旋钮,使数字显示正好为“100.0”。
(6)吸光度的测定 将选择开关置于“A”,盖上试样室盖子,将空白液置于光路中,调节吸光度调节旋钮,使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内,盖上试样室盖,轻轻拉动试样架拉手,使待测溶液进入光路,此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后,打开试样室盖,切断光路。重复上述测定操作1~2次,读取相应的吸光度值,取平均值。
(7)浓度的测定 选择开关由“A”旋置“C”,将已标定浓度的样品放入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测样品放入光路,此时数字显示值即为该待测溶液的浓度值。
(8)关机 实验完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比色皿座架用软纸擦净。
4. 722分光光度计
打开电源开关预热30分钟、
2调整单色器选择测量波长、
3拉出比色皿拉杆、将比色皿取出、
4将被测溶液倒入比色皿中、
5把比色皿放入比色皿支架推入到测量位置、
6读取吸光度值
5. 可见分光光度计使用方法
在模式选择屏幕中选择<1.Photometric光度>选项,将显示参数配置屏幕;用GOTOWL键设定测量波长;按F2键设定进样控制;按START/STOP键时,测量开始,显示测量屏幕;如需做空白校正,应在测量前先设置空白样品,然后,按AUTO-ZERO键,将测量值置为OABS(100%);
6. 722分光光度计使用方法
操作基本步骤:
1.开启电源,指示灯亮,仪器预热20分钟,选择开关置于"T"。
2. 调节波长,把测试所需的波长调节至刻度线处。
3. 样品配置好后进行测定前,必须先调“0”,用蒸馏水清洗比色皿若干次后,在比色皿中装入蒸馏水,打开试样室盖(光门自动关闭),调节"0%T"旋钮,使数字显示为"00.0",盖上样品室盖,将参比溶液比色皿置于光路,调节透过率"100%T"旋钮,使数字显示为"100.0T",重复几次调好为止。
4. 进行样品的测量,用样品溶液清洗比色皿数次,然后将被测溶液置于光路中,数字表上直接读出被测溶液的吸光度值。(样品需做平行试验求吸光度平均值)
5. 记录数据,根据公式计算出结果。
6. 测定完成后关上试样室盖,清洗比色皿,关闭开关和电源。
7. 分光光度计原理
工作原理如下:由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,根据这一特性,可对物质进行定性分析。
使用方法:将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中,在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质,则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样,也可以和现成的标 准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确,精密度高,且测定条件要相同。 实验证明,不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同,这可以利用紫外光谱来判断化合物在不 同溶剂中氢键强度,以确定选择哪一种溶剂 。