1. 分光光度计原理
分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合比色原理--比耳定律
2. 分光光度计的工作原理
比色法不是分光光度法。
原理不同：
比色法的原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色，颜色深度和物质含量成正比，则根据光被有色溶液吸收的强度，即可测定溶液中物质的含量。
分光光度法的原理基于朗伯一比尔（Lambert - Beer）定律，在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与不同波长相对应的吸收强度。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法。
3. 分光光度计原理是什么定律
分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b(cm)成正比。
其定律表达式A=abc（a是比例系数）。当c的单位为mol/l时，比例系数用ε表示，则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L·mol-1·cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。
T(透光率)=I/I0A(吸光度)= -lgT或A=K·C·L(比色皿的厚度)测定时，入射光I,吸光系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，即“K”为常数。比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。 《分光光度计的表头上，一行是透光率，一行是吸光度。》
4. 分光光度计使用注意事项
一、可见分光光度计开机
1、开机前，检查电源插座是否接上；
2、启动电源开关，仪器显示“723C”
3、仪器经自测后，按“MODE”键后再按“2”键，仪器显示“DATA”
二、可见分光光度计基本使用方法
1、按“GO TO λ”键，输入设定波长；
2、四个比色皿，其中R位置放置参比试样，其余三个放入待测试样。将比色皿放入样品池内的比色皿架中，盖上样品池盖；
3、将参比试样推入光路，按“ABS%”键，使仪器自动调零和置满度；
4、然后将待测试样推入光路，显示试样的吸光度值；
5、如果要想将待测试样的数据打印出，只需按“START/STOP”键即可。
可见分光光度计使用注意事项：
1、每天使用结束后，应仔细检查样品室内是否有溶液溢出，若有溢出必须随时用滤纸吸干；
2、可见分光光度计仪器使用完毕，用防尘套罩住。
紫外可见分光光度计用法简要过程
开机：打开电脑以及分光光度计。
软件的打开：直接点击图标，然后从菜单栏，文件——打开，找到相关标线打开。（另一种方法，从我的电脑——紫外——找到标线打开）
点击connection，机器自检，待自检结束，点击“OK”（若实验前机器处于打开状态就不会出现自检）
调零：首先在里面一个通道放装有蒸馏水的比色皿（放入比色皿后一定要把盖关闭），调零。然后再外面一个通道放装有蒸馏水的比色皿，观察吸光度，选择最小的一个，然后再次调零。（多点几次调零键，以确保调零）
测样：用选择好的比色皿测试，首先用要测得样品润洗比色皿两到三次。然后倒入样品（注意，拿比色皿时，不要碰到光滑面，用手指捏住毛面即可，倒液体尽量不要溢出到光面，如有溢出，用擦镜纸擦干，观察，没有水珠和痕迹，再放入通道中。以免影响吸光度。）
在数据栏，ID栏敲入数字编码，然后把光标放在浓度或者吸光度栏，点击read，得吸光度。（测样品时应多取几次样品做平行，直到结果数字相近）测量结束后，保存数据并把数据抄录下来，做进一步的计算分析。
断开连接，点击unconnention。一次关闭分光光度计，电脑。关掉电源。用蒸馏水清洗用过的比色皿，放回原处。把实验台上整理干净。
吸附实验流程：取适当初始浓度的样品，加入适量管——震荡或者搅拌一定时间——离心分离——取样，稀释至50ml——分光光度计检测——记录数据
注意：
1，离心分离时要选择一样的管，并且倒入相同的样品。
2，实验过程要做好详细记录。
3，实验结束把用过的仪器，器皿，清洗干净，烘干。
三、粉末样品的制备
1．选择高质量的微栅网（直径3mm），这是关系到能否拍摄出高质量高分辨电镜照片的第一步；（注：高质量的微栅网目前本实验室还不能制备，是外购的，价格20元/只；普通碳膜铜网免费提供使用。）
2．用镊子小心取出微栅网，将膜面朝上（在灯光下观察显示有光泽的面，即膜面），轻轻平放在白色滤纸上；
3．取适量的粉末和乙醇分别加入小烧杯，进行超声振荡10~30min，过3~5 min后，用玻璃毛细管吸取粉末和乙醇的均匀混合液，然后滴2~3滴该混合液体到微栅网上（如粉末是黑色，则当微栅网周围的白色滤纸表面变得微黑，此时便适中。滴得太多，则粉末分散不开，不利于观察，同时粉末掉入电镜的几率大增，严重影响电镜的使用寿命；滴得太少，则对电镜观察不利，难以找到实验所要求粉末颗粒。建议由老师制备或在老师指导下制备。）
4．等15 min以上，以便乙醇尽量挥发完毕；否则将样品装上样品台插入
5. 分光光度法原理
原理
在中性条件下用过硫酸钾（或硝酸－高氯酸）使试样消解，将所含磷全部氧化为正磷酸盐。在酸性介质中，正磷酸盐与钼酸铵反应，在锑盐存在下生成磷钼杂多酸后，立即被抗坏血酸还原，生成蓝色的络合物。
本标准规定了用过硫酸钾（或硝酸—高氯酸）为氧化剂，将未经过滤的水样消解，用钼酸铵分光光度法测定总磷的方法。
总磷包括溶解的、颗粒的、有机的和无机磷。
本标准适用于地面水、污水和工业废水。
取25mL水样，本标准的最低检出浓度为0.01mg/L，测定上限为0.6mg/L。在酸性条件下，砷、铬、硫干扰测定。
6. 分光光度仪
方法/步骤
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第一步就是打开电源，打开分光光度计的开关，打开盖子，加热约十分钟左右。
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第二步就是把灵敏开关线拨到一档位，如果不能够让零点调节器刚好打在零，就要考虑用较高档位操作了，否则会有较大误差。
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第三步就是要根据所要测量的光波长来转动光度计上面的波长选择按键。
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第四步就是把空白管装满液体，对准光路，液体装到四分之三处即可。
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第五步就是再次打开盖子，拨动调零器的旋钮，知道表盘上面的指针刚好指零点的位置。
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第六步就是可以放入待测样品的液体管，进行对比，看测定管子的密度值显示器即可。
7. 分光光度计使用方法
分光光度计的使用和计算方法是通过分光光度计的显示屏来显示