1. 分光光度计比色法测定的注意事项有哪些
比色法(colorimetry)是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。早在公元初古希腊人就曾用五倍子溶液测定醋中的铁。1795年，俄国人也用五倍子的酒精溶液测定矿泉水中的铁。但是，比色法作为一种定量分析的方法，大约开始于19世纪30～40年代。这是利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定性分析的一种方法，其原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色，颜色深度和物质含量成正比，则根据光被有色溶液吸收的强度，即可测定溶液中物质的含量。如利用光电效应，将透过有色溶液后的光强度成正比例地变换为电流的强度来进行比色定量的方法，称为光电比色法。
以生成有色化合物的显色反应为基础，比色分析对显色反应的基本要求是：反应应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，是比色分析的关键。
常用方法
常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯-比尔定律(A=εbc)为基础。常用的目视比色法是标准系列法，即用不同量的待测物标准溶液在完全相同的一组比色管中，先按分析步骤显色，配成颜色逐渐递变的标准色阶。试样溶液也在完全相同条件下显色，和标准色阶作比较，目视找出色泽最相近的那一份标准，由其中所含标准溶液的量，计算确定试样中待测组分的含量。
与目视比色法相比，光电比色法消除了主观误差，提高了测量准确度，而且可以通过选择滤光片来消除干扰，从而提高了选择性。但光电比色计采用钨灯光源和滤光片，只适用于可见光谱区和只能 得到一定波长范围的复合光 ， 而不是单色光束，还有其他一些局限，使它无论在测量的准确度、灵敏度和应用范围上都不如紫外-可见分光光度计。20 世纪30～60年代，是比色法发展的旺盛时期，此后就逐渐为分光光度法所代替。
常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，前者用眼睛观察，后者用光电比色计测量，两种方法都是以朗伯－比尔定律（见紫外-可见分光光度法）为基础。
2. 用分光光度计进行比色测定时
）滤液的消解：将样品用过硫酸钾方法消解，吸取10ml的滤液（确保水样中的磷含量不会超过30ug）于50ml具塞刻度管中，加入5%的过硫酸钾溶液4ml，加塞后管口包一小块纱布并用线扎紧，以免加热时玻璃塞冲出去，将具塞刻度管放在大烧杯中，置于高压蒸汽消毒器或压力锅内中加热，待锅内压力达1.1kg/cm2（相当于温度为120℃）时，保持此压力1h后停止加热，待压力表示降至零后，取出冷却，试剂空白和标准系列也经同样的消解操作。
若之前用酸保存水样则在消解前应用NaOH调节pH，在水样中加两滴酚酞，用NaOH调节，当水样出现微粉色时在滴一滴稀酸，调至无色即可。（2）将消解的滤液用钼锑抗分光光度法比色测定。制作标准系列曲线：取7支25ml的比色管，分别加0ml 、0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10.0ml、15.0ml的浓度为2ug /ml 的磷标准使用液，用水定容至25ml,分别加1ml的抗坏血酸，混匀，30s后加入2ml钼酸铵，显色15min，以试剂空白为参比在700nm波长处测定吸光度。根据浓度与吸光度的值作标准曲线。（3）样品测定：取5ml样品于25ml的比色管中，用水定容至25ml, 加1ml的抗坏血酸，混匀，30s后加入2ml钼酸铵，显色15min，以试剂空白为参比在700nm波长处测定吸光度,根据吸光度值利用标准曲线求出样品浓度。
3. 可见分光光度法比色法操作的注意事项
常用的颜色深度测试方法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯-比尔定律(A=εbc)为基础。常用的目视比色法是标准系列法，即用不同量的待测物标准溶液在完全相同的一组比色管中，先按分析步骤显色，配成颜色逐渐递变的标准色阶。试样溶液也在完全相同条件下显色，和标准色阶作比较，目视找出色泽最相近的那一份标准，由其中所含标准溶液的量，计算确定试样中待测组分的含量。
光电比色法是在光电比色计上测量一系列标准溶液的吸光度，将吸光度对浓度作图，绘制工作曲线，然后根据待测组分溶液的吸光度在工作曲线上查得其浓度或含量。与目视比色法相比，光电比色法消除了主观误差，提高了测量准确度，而且可以通过选择滤光片来消除干扰，从而提高了选择性。但光电比色计采用钨灯光源和滤光片，只适用于可见光谱区和只能 得到一定波长范围的复合光， 而不是单色光束，还有其他一些局限，使它无论在测量的准确度、灵敏度和应用范围上都不如紫外-可见分光光度计。20 世纪30～60年代，是比色法发展的旺盛时期，此后就逐渐为分光光度法所代替。
4. 分光光度计 比色法
打开比色暗箱，把标准溶液放在第一个框中，将透射比调为100，关上暗箱，再将透射比调为0，再揭开暗箱，看一下透射比，再调为100，将这个步骤重复进行多次，将待测分光度溶液放入暗箱，拉动按钮，每拉动一下就会动一格，进行吸光度的测试，做完后放到最后面，关闭暗箱，关掉电源。
5. 分光比色法测定要注意事项
①在制备样品溶液时,小心加热,勿蒸干,勿使其崩溅。
②若用玻璃纤维滤筒采样,因滤筒中铅的木底较高,应适当增大采样体积。
③为克服石墨炉原子吸收法测定Pb时的基体干扰,可加入基体改进剂,例如:Pd、(NH4)2HPO4、La、Pt,Zr等盐类。加入基体改进剂后,可适当提高灰化温度(一般可提高200～300℃),这样能减少基体产生的背景吸收。
④用金属碳化物涂层石墨管,在测定酸度较大的试样时,涂层容易受到破坏使测定精度变差,应注意测定试样的酸度不超过0.2%。
⑤铅含量高时,可用火焰原子吸收分光光度法测定。
⑥本方法检测的铅及其化合物,系指经滤筒或滤膜采集的颗粒物中能被硝酸-高氯酸体系浸出的铅及其化合物。
6. 可见分光光度比色法操作的注意事项
在光度分析中，参比溶液是用来调节透射比100%，即将吸光度调为0，然后再测定待测溶液的吸光度。
适宜参比溶液的选择：
溶剂参比：所用试液与试剂均无色时，选用溶剂参比；
试剂参比：如果显色剂或其他试剂在测定波长有吸收，而试液无吸收；
试液参比：如果试样中其他共存组分有吸收，但显色剂等其他试剂无吸收；
褪色参比：如果显色剂和样品基体均有吸收，可在显色液中加入褪色剂，选择性地与被测物反应，生成稳定无色的配合物，使已显色的产物褪色。
参比溶液应尽可能全部抵消各种共存物质的干扰，使试液的吸光度真正反映待测物的浓度。