蛋白质质谱检测(质谱法鉴定蛋白质)

海潮机械 2023-01-18 10:55 编辑:admin 254阅读

1. 质谱法鉴定蛋白质

蛋白质组“proteome”源于蛋白质“protein”与基因组“genome”两词的杂合。蛋白质组是指在特定时间由基因组、细胞、组织或生物体表达的或可以表达的整套蛋白质。蛋白质组鉴定即是对一个蛋白质集合中的蛋白质进行鉴定。目前,蛋白质组鉴定可以采用图像分析技术及质谱相关技术。

2. 质谱法鉴定蛋白质原理

肽指纹图谱:

每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段,这些肽段的质量(分子量)就是这个蛋白的肽指纹图。

当一个未知蛋白被酶解,用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量。然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配。

匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白。

步骤:

2DE 切点 消化 送入质谱仪分析 质谱仪自动获得质量数 送入数据库进行搜索 得出结果。

关键:要知道质谱仪是用于检测小分子质量的仪器,只可以检测质量。

3. 蛋白质质谱鉴定的基本原理

生命科学被誉为21世纪的最前沿科学之一,随着人类第一张基因序列草图的完成和发展,生命科学的研究也将进入一个崭新的后基因组学,即蛋白质组学时代。

正如基因草图的提前绘制得益于大规模全自动毛细管测序技术一样,后基因组研究也将会借助于现代生物质谱技术等得到迅猛发展。本文拟简述生物质谱技术及其在生命科学领域研究中的应用。

1 质谱技术

质谱( Mass SPectrometry)是带电原子、分子或分子碎片按质荷比(或质量)的大小顺序排列的图谱。

质谱仪是一类能使物质粒子高化成离子并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与否实现质荷比分离,并检测强度后进行物质分析的仪器。质谱仪主要由分析系统、电学系统和真空系统组成。

质谱分析的基本原理

用于分析的样品分子(或原子)在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离子和碎片离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子,进入由电场和磁场组成的分析器,离子束中速度较慢的离子通过电场后编转大,速度快的偏转小;

在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转,即速度慢的离子依然偏转大,速度快的偏转小;当两个场的偏转作用彼此补偿时,它们的轨道便相交于一点。

与此同时,在磁场中还能发生质量的分离,这样就使具有同一质荷比而速度不同的离子聚焦在同一点上,不同质荷比的离子聚焦在不同的点上,其焦面接近于平面,在此处用检测系统进行检测即可得到不同质荷比的谱线,即质谱。

通过质谱分析,我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分子中同位素构成和分子结构等多方面的信息。

4. 质谱法鉴定蛋白质含量

蛋白指纹图谱是一种生物技术,它可以用来研究蛋白质的结构和功能。蛋白指纹图谱是通过对蛋白质进行电泳分离,并使用质谱测定技术对蛋白质进行分析,生成一张“图谱”来表示蛋白质的分子量、结构和组成等信息。

蛋白指纹图谱技术可以用来研究蛋白质的结构和功能之间的关系,帮助研究人员了解蛋白质的作用以及其在生物体内的功能。蛋白指纹图谱技术还可以用来鉴定蛋白质的种类和组成,帮助研究人员确定蛋白质的来源和分类。此外,蛋白指纹图谱技术还可以用来检测蛋白质的变化,帮助研究人员了解蛋白质在不同条件下的变化情况。

5. 质谱法鉴定蛋白质的方法

质谱测蛋白质分子量只需要准备很少的样品就可以了样品状态最好为干粉,或者是HPLC的峰尖收集液样品量一般在50pmol就足够了,如需要进行复杂的串联质谱分析,样品量适当增加

6. 如何通过质谱鉴定蛋白质

化学的方法是埃德曼降解法,这种方法是瑞典科学家埃德曼创立的连续测定蛋白质或肽链N端氨基酸残基序列的经典方法.用异硫氰酸苯酯(PTH)等与多肽反应,逐个水解N端氨基酸残基

依次生成各种PTH-氨基酸,层析鉴定PTH-氨基酸就可从N端逐个确定被测肽段的氨基酸残基排列顺序. 对于含有氨基酸残基较多的蛋白质,一般采用质谱的方法.质谱轰击蛋白质是指称为碎片,根据碎片在电场中的运动情况确定质荷比,在根据计算机软件分析和数据库确定蛋白质的氨基酸序列.

7. 蛋白质色谱法

糖化血红蛋白色谱法是指利用阳离子交换分离HPLC测定。

糖化导致血红蛋白分子表面阳离子丢失。在弱的阳离子交换剂中,例如Biorex70,伴有增加的离子浓度和(或)pH下降,糖化血红蛋白在非糖化血红蛋白前先洗脱。阳离子交换色谱法可用于小型、微型或大型柱层析方法或部分或全自动的PHLC/FPLC方法。因为,醛亚胺型其他翻译后修饰血红蛋白,例如、甲酰化、乙酰化、乙醛加合物、降解物、老化人工物品和异常血红蛋白电荷交换也不同于正常的HbA0,所以已经列出了许多阳离子交换层析法的干扰因素。使用常规HPLC的方法。分离糖化血红蛋白亚组分是能达到满足需求的临床精密度。

扩展:

糖化血红蛋白(HbA1c)是红细胞中的血红蛋白与血清中的糖类(主要指葡萄糖)通过非酶反应相结合的产物。形成糖化血红蛋白的非酶反应具有持续、缓慢、不可逆的特点,因此糖化血红蛋白的含量是由过去的而非即时的血糖浓度决定的,与检测前是否空腹、是否注射胰岛素、是否服用降糖药物等因素无关。通常认为,糖化血红蛋白浓度可有效地反映过去8~12周平均血糖水平。

8. 质谱检测蛋白质

主要是儿童患有遗传代谢性疾病引起。如果儿童患有遗传代谢性疾病,儿童就会出现串联质谱的异常,串联质谱的具体内容主要可以分为氨基酸代谢以及脂肪代谢、蛋白质代谢的异常。因为儿童如果患有遗传代谢性疾病,常常是由于父母的家族遗传以及儿童在胎儿期的基因突变等因素引起。