1. 蛋白质检测器
质谱仪器分析是先将物质离子化,按离子的质荷比分离,然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法.以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标,离子质荷比为横坐标所作的条状图，就是我们常见的质谱图.
质谱分析仪器-质谱图术语
质荷比：离子质量(以相对原子量单位计)与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值,写作m/Z.
峰：质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰.
离子丰度：检测器检测到的离子信号强度.
基峰：在质谱图中,质荷比范围内强度大的离子峰称作基峰.
总离子流图：质量色谱图;准分子离子;碎片离子;多电荷离子;同位素离子
总离子流图：在选定的质量范围内,所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC图.
质量色谱图：某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所作的图.
利用质量色谱图来确定特征离子,在复杂混合物分析及痕量分析时，是LC/MS测定中有用的方式.当样品浓度很低时，LC/MS的TIC上往往看不到峰,此时,根据得到的分子量信息,输入M+1或M+23等数值,观察提取离子的质量色谱图,检验直接进样得到的信息是否在LC/MS上都能反映出来,确定LC条件是否合适,以后进行MRM等其他扫描方式的测定时可作为参考.
准分子离子：指与分子存在简单关系的离子,通过它可以确定分子量.液质中常见的准分子离子峰是[M+H]+ 或[M-H]- .
在ESI中, 往往生成质量大于分子量的离子如M+1,M+23,M+39,M+18......称准分子离子,表示为:[M+H]+,[M+Na]+等
碎片离子：准分子离子经过一级或多级裂解生成的产物离子.
碎片峰的数目及其丰度则与分子结构有关,数目多表示该分子较容易断裂,丰度高的碎片峰表示该离子较稳定,也表示分子比较容易断裂生成该离子.
Ephedrine, MW = 165
多电荷离子：指带有2个或更多电荷的离子,常见于蛋白质或多肽等离子.有机质谱中,单电荷离子是绝大多数,只有那些不容易碎裂的基团或分子结构-如共轭体系结构-才会形成多电荷离子.它的存在说明样品是较稳定的.采用电喷雾的离子化技术,可产生带很多电荷的离子,后经计算机自动换算成单质/荷比离子.
同位素离子：由元素的重同位素构成的离子称为同位素离子.
各种元素的同位素,基本上按照其在自然界的丰度比出现在质谱中,这对于利用质谱确定化合物及碎片的元素组成有很大方便, 还可利用稳定同位素合成标记化合物,如:氘等标记化合物,再用质谱法检出这些化合物,在质谱图外貌上无变化,只是质量数的位移,从而说明化合物结构,反应历程等
质谱分析仪器-质谱图的确定
(1)确定分子离子,即确定分子量
氮规则:含偶数个氮原子的分子,其质量数是偶数,含奇数个氮原子的分子,其质量数是奇数.与高质量碎片离子有合理的质量差,凡质量差在3~8和10~13,21~25之间均不可能,则说明是碎片或杂质.
(2)确定元素组成,即确定分子式或碎片化学式
高分辨质谱可以由分子量直接计算出化合物的元素组成从而推出分子式
低分辨质谱利用元素的同位素丰度,例:
(3)峰强度与结构的关系
丰度大反映离子结构稳定
在元素周期表中自上而下,从右至左,杂原子外层未成键电子越易被电离,容纳正电荷能力越强,含支链的地方易断,这同有机化学基本一致,总是在分子薄弱的地方断裂.
不同类型有机物有不同的裂解方式
相同类型有机物有相同的裂解方式,只是质量数的差异需要经验记忆.
2. 蛋白质检测仪器
1、在使用仪器之前，首先将记录仪(色谱工作站)、自动部分收集器、恒流泵以及层析柱等所需配套仪器连接好，接好各类插头与插座(220V电源)。
2、将检测仪电源开关ON按下，如果电源指示灯亮了，那么表示仪器电源开始工作了，之后对光源指示灯进行观察，如果光源指示灯亮了，那么说明光源已经开始工作,仪器能够进入到工作状态,旋转检测仪波长旋钮旋到所需波长刻度位置，拨量程旋钮到1%档（先将仪器预热20min，然后等到基线平直以后就能够进行加样测试）。
3、将记录仪电源开关接通，拨动电源开关使指示灯亮。纸速度能够通过记录仪说明书进行调节，用户按照需求自行掌握,用10mV档进行测量。这时，记录仪指针由零点开始向右移动某一刻度，对检测仪光量”旋钮进行调节，使指针在记录仪大约中间位置5mV左右数字停留。
4、在恒流泵上接上检测仪进样口聚乙烯塑料，在检测仪流过凝胶层析柱中缓冲液（1-3ml/min为恒流泵流量视凝胶层析柱大小），将吸光度A值使用调零调整为0
5、完成上述步骤之后，析系统平衡之后就能够开始使用洗脱液对样品进行洗脱，再一次调吸光度0点在洗脱前。不能够再在洗脱过程完成之前对0旋钮进行调节。当洗脱液从检测仪流过的时候，大于零的数值为吸光度显示，随着样品的浓度的变化，吸光度数值大小也会发生改变。结束洗脱后，稍大于零的数值为吸光度显示。
6、记录仪自动绘制吸光度图谱以及数字显示吸光度这两个检测系统之间是互相独立的。蛋白检测仪器所绘峰值大小与数字显示吸光度不能够互相换算，没有直接的关系。
7、结束测试之后，必须将电源切断，并且将聚乙烯塑料管和样品池用蒸馏水进行清洗。
3. 蛋白质检测器怎么使用
蛋白质检测仪【恒美HM-Z12】能够检测乳制品中的蛋白质。食品中的蛋白质含量在一定程度上代表了食品的营养价值，如今市面上很多食品配料与实际情况并不符，很多食品用其他物质来代替蛋白质，从而降低了食品的营养价值。像奶粉等乳制品蛋白质含量就会较高，乳制品中的蛋白质是严格按照一定的配方比例生产的，所以用蛋白质检测仪测量乳制品中蛋白质含量具有重要意义。
如今随着食品行业的发展，乳品工业已经成功进阶为食品工业的重要组成部分。乳制品的加工销售量也得到了很多人的追捧。但是乳制品商家众多，很多人并不会按照国标来生产，所以这些乳制品中的蛋白质并不达标，很多婴儿吃了这样的乳制品会严重影响身体生长发育，甚至有些孩子出现了大头症等症状。蛋白质检测仪【恒美HM-Z12】可以快速的检测食品中的蛋白质含量，确定乳制品是否合标。
4. 蛋白质在线检测
WB实验的基本原理：
蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。
与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
三、WB实验步骤
(一)试剂准备
(二)蛋白样品制备
(三) 蛋白含量的测定
(四)SDS-PAGE电泳
(五)转膜
(六)免疫反应
(七)化学发光，显影，定影
(八)凝胶图象分析
5. 蛋白质检测设备
目测尿蛋白试纸也是准确的。在没有自动检验设备之前，一直都是采用试纸的方法进行检测。如果尿蛋白试纸检测阳性的话，建议进一步的做肾功能的检测，排除一下肾炎的可能。患有肾炎时，肌酐会明显的增高。进一步的明确肾炎类型，需要做肾脏穿刺的。
6. 蛋白质检测器使用方法
凝胶过滤是通过蛋白分子量大小不同来分离不同的蛋白质，有三个峰值说明溶液中含有多种分子量不同的蛋白质。即使只有一种蛋白质，但是因为结构的问题，部分形成了多聚体，部分依然以单体的形式存在时，也会出现多个不同的峰值。另外，核酸、色素等非蛋白物质也有可能在检测器上出现峰值。
7. 快速检测蛋白质仪器
NanoDrop 1000超微量分光光度计是美国 Nanodrop公司制造的是一款独特的测定核酸蛋白质浓度的仪器，应用于核酸，蛋白质含量测定。Nanodrop ND-1000 UV 在设计上采用了快速、微量的风格，并同时提升了紫外/可见分光光度计的功能配置，是一款从事分子生物学科研的不可多得的仪器。