1. 分光光度计酶标仪换算
分光光度计对一定浓度吸光物质需设置最大吸收的波长,特定物质的最大吸收波长可以查阅文献后在仪器上设定,测定待测液浓度需作标准曲线,标准曲线吸光度一般在0.2到0.8和浓度呈线性关系。
2. 光谱仪 分光光度计
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
3. 分光光度计和酶标仪最后结果差异
结晶紫是一种碱性染料,可以和细胞核中的DNA结合,从而产生细胞核染色。
结晶紫染色液(Crystal Violet Staining Solution)是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成深紫色的染色液。用于革兰氏染色。
结晶紫也可称之为龙胆紫。当它溶解后,可以被活细胞摄入。同时可以使DNA、蛋白质、脂肪着色。染色显示细胞核呈蓝色,细胞质呈粉红色。肉眼显示整个细胞呈深蓝色。在分光光度计或酶标仪上可以进行定量分析以评价细胞生长繁殖情况。
扩展资料:
染色法着色灭活菌是细菌形态学检测的常用方法,广泛应用于临床实验室。而活体细菌的着色检测有实际应用价值。为此我们首次通过苯胺染料结晶紫染色细菌,探讨活体细菌着色的最佳浓度和染色时间,并对细菌保存液加以改进,旨在为活体细菌染色的形态学检测建立方法。
GENMED结晶紫细胞染色试剂是一种旨在使粘附生长的单细胞层细胞(群落)摄取结晶紫染料而获得细胞繁殖密度定量信息的广谱染色材料和权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明、顶级杂志推荐的。其适用的细胞是呈单细胞层(Monolayer)生长的人体和动物细胞。产品严格无菌,即到即用,性能长期稳定,细胞着色率100%。
技术背景
结晶紫也可称之为龙胆紫。当它
4. 分光光度计 酶标仪
酶标仪就是一台变相的光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计几乎相同。 FC酶标仪所用的单色光既可通过相干滤光片来获得,也可用分光光度计相同的单色器来得到。
在使用滤光片作滤波装置时与普通比色计一样,滤光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的。
光源灯发出的光经聚光镜,光栏后到达反射镜,经反射镜作90°反射后垂直通过比色溶液,然后再经滤光片送到光电管。
5. 酶标仪与一般分光光度计相比有哪些优点
方法/步骤分步阅读
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先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
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按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
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接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
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在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2),向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数),将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
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用酶标仪测定在450nm处的吸光度。若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
总结:
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1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度。
3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
注意事项
如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基。
当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
6. 分光光度计和酶标仪区别
医学检验仪器是用于疾病诊断、疾病研究和药物分析的现代化实验室仪器,是集光、机、电于一体的仪器。它涉及光学、机械、电子、计算机、材料、传感器、生物化学、放射等技术领域,是多学科技术相互渗透和结合的产物。
我国各级医院常用的医学检验仪器有光电比色计、分光光度计、生化分析仪、酶标仪、火焰光度计、尿液分析仪、血气分析仪、电解质分析仪、血球计数器、气相和液相色谱仪等。
医学检验仪器始终跟踪各相关学科的前沿。电子技术的发展、计算机的应用、新材料新器件的产生以及新的分析方法等都在医学检验仪器中体现出来。
7. 酶标仪吸光度计算公式
常见的显色剂为TMB
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的PTHrP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中PTHrP水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入PTHrP抗原、生物素化的抗大鼠PTHrP抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
8. 分光光度计酶标仪换算方法
CK 活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按组织蛋白含量计算
酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷e÷d×V 反总÷(V 样×Cpr)= 804×△A÷Cpr
(2)按组织样本质量计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每克样品1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK 活性(nmol/min/g)=△A÷e÷d×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 804×△A÷W
(3)按血清计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK 活性(nmol/min/L)=△A÷e÷d×V 反总÷V 样×1000= 804000×△A
e:NADPH 微摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,
0.3mL;V 样:反应体系中样本体积,0.06mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,
测定原理:
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6- 磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP
+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸
馏水。
9. 显微分光光度计
一、 明视野观察(Bright field) 二、浮雕相衬显微镜(RC) 三、微分干涉称镜检术(Differential interference contrast DIC) 四、暗视野观察(Dark field) 五、偏光显微镜(Polarizing microscope ) 六、相差镜检法(Phase contrast) 七、荧光显微镜(Fluorescence Microscopy) 以上列举了常见的观察显微镜的7种方法目录,下面我们来说细谈谈各个方法的不同在于哪里,我们应该如何取舍。 1)我们看一种大家都熟悉的镜检方式——明视野镜检,所有显微镜均能完成此功能; 2)相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检,也就是有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见; 3)微分干涉称镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等,光束分别在距离很近的两点上通过被检物体,在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小,而不出现重影现象,使图象呈现出立体的三维感觉; 4)暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的象,m..m 暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜; 5)偏光显微镜是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射的物质,在偏光显微镜下就能分辨的清楚,当然这些物质也可用染色发来进行观察,但有些则不可能,而必须利用偏光显微镜; 6)1975年,Robert Hoffman 博士发明2002年,专利到期,各显微镜厂家纷纷推出采用以自己名义命名的RC技术产品原理斜射光照射到标本产生折射、衍射,光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影,从而使透明标本表面产生明暗差异,增加观察对比度 7)荧光镜检术是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,然后观察。 二、 物镜的工作距离: 显微镜的工作距离就是指物镜的工作距离,放大倍数越大,数值孔径越大,工作距离就越短,但是无穷远像距显微物镜的工作距离可以比同放大倍率的195显微物镜的长。 显微镜的用途及分类 目前,光学显微镜已由传统的生物显微镜演变成诸多种类的专用显微镜,按照其成像原理可分为: ①几何光学显微镜:包括生物显微镜、落射光显微镜、倒置显微镜、金相显微镜、暗视野显 微镜等。 ②物理光学显微镜:包括相差显微镜、偏光显微镜、干涉显微镜、相差偏振光显微镜、相差 干涉显微镜、相差荧光显微镜等。 ③信息转换显微镜:包括荧光显微镜、显微分光光度计、图像分析显微镜、声学显微镜、照 相显微镜、电视显微镜等。 1.显微镜的用途: a生物显微镜:一般来说显微镜可分大类为体视显微镜与生物显微镜。由于用途不同、要求不同,因而产生了许多分支,但基本原理还是一样的。偏光、相衬、透射和落射等等还是归属于生物显微镜。 b体视显微镜:又称解剖显微镜、实体显微镜和立体显微镜,是用途比较多的显微镜。其操作简便,对标本要求不高,工作距离长,观察时有较强的立体感,可以对实物进行观察,也可以在观察的同时对标本进行一些操作。而不是像生物显微镜那样需要对标本进行切片处理,切片需要相应的技术和设备。因此,体视显微镜在微电子、精密仪器仪表装配与维修、微雕等领域有很广泛的应用。在生物、医学领域广泛用于解剖操作和显微外科手术(目前已归类为手术显微镜),用于生物、医学领域其光源只能用冷光源(光纤);在工业中用于微小零件和集成电路的观测、装配、检查等工作。 c金相显微镜 :很多人都喜欢写成"金像显微镜", 金相显微镜是专门用于观察金属和矿物等不透明物体金相 组织的显微镜。这些不透明物体无法在普通的透射显微镜中观察,故相和普通显微镜的主要差别在于前者以反射光,而后者以透射光照明。在金相显微镜中照明光束从物镜方向射到被观察物体表面,被物面反射后再返回物镜成像。这种反射照明方式也广泛用于集成电路硅片的检测工作。 2.光源: 显微镜用的光源 主要有:荧光灯、LED灯、卤素灯、白炽灯、冷光源(光纤)等等,但市面上因品种较多,所以良莠不齐, 购时还应多注意: 偏光显微镜是用于研究所谓透明与不透明各向异性材料(鉴定物质细微结构光学性质)的一种显微镜。凡具有双折射性的物质,在偏光显微镜下就能分辨得清楚,当然这些物质也可用染色法来进行观察,但有些则不可能,而必须利用偏光显微镜。 荧光显微镜 :利用标本发出的荧光来观察物体 立体显微镜:可用来观察物体的立体像等 投影显微镜:可将物像投影在投影屏上,供几个人同时观察 倒置显微镜:用于织培养和微生物的研究 相衬显微镜:用于观察无色透明的标本 细胞培养、组暗视场显微镜:用于观察细菌和螺旋体的运动 单筒显微镜 、视频显微镜、便携式显微镜,这几类显微镜其实就是体视显微镜的延伸,原理与性质是一样的。只不过是销售商对其方便销售而采取的叫法,真正名称还是叫做体视显微镜。 检测显微镜:一般来说,就是经过改良的体视显微镜 或 金相显微镜 。对于观察精度要求不高的物体可用体视显微镜来代替,如:观察晶元、线路板等,而对于要求高的被观察物体则要用到后者,如:半导体硅晶片、金相标样、金属材料等等,由于特殊需要还可选配暗场、偏光及试样压平器等附件。