1. 双光束双波长分光光度计
吸光度与浓度换算公式为:A=lg(1/T)=Kbc。
A为吸光度,T为透射比,是出射光强度(I)比入射光强度(I0),K为摩尔吸光系数,它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关。
公式称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律,它是光吸收的基本定律,适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质,包括气体、固体、液体、分子、原子和离子,它是比色分析及分光光度法的理论基础。
2. 双光束分光光度计与单光束分光光度计
双光束分光光度计英文缩写
double beam spectrophotometer
3. 双光束双波长分光光度计原理
分光光度计介绍:
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。该仪器是食品厂、饮用水厂办理QS、HACCP认证的必备检验设备。
分光光度计原理:
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计组成:主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
分光光度定义:
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。
常用的波长范围:
(1)200~400nm的紫外光区
(2)400~760nm的可见光区
(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区
所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。
分光光度计的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定。因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。
分光光度计操作方法:
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较)。
3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向t=0处。
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的t=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
分光光度计注意事项:
1.该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2.使用本仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
3.在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
4. 双波长分光光度计和单波长分光光度计
因为两次测量即使仪器每次精准调好波长,但比色皿是手动放置的,不能保证每次放置在同样的位置,自然结果就不可能一样了,有很多误差存在的。这种情况,多测几组去平均值就可以啦。
分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作波段边缘波长处,由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低,杂散光的影响为显着。
5. 双波长分光光度计与单
紫外分光度计同一波长需要调零。一般物质在不同波长下的吸光度不一样,不同物质的吸光度也不一样,除非是同一种物质和同一波长,否则紫外分光度计在检测不同物质的吸光度时,即使是同一波长也需要调零。紫外分光光度计就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。
6. 单波长双光束光度计
1、原理:利用一定频率的紫外—可见光照射分析物,它将有选择的被吸收。吸收光谱可以反映出特征。
2、结构组成:光源、单色器、样品池、检测器。单光束分光光度计的,双光束分光光度计组成。
2、光源:提供连续的辐射。单色器是分光光度计的心脏部分,是把来自光源的混合光分解成单色光,并能随意改变波长。
7. 双波长分光光度计的应用
双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的。其理论基础是微分吸收和等吸收波长。
8. 双光束分光光度计的简介及使用
光束紫外可见分光光度计是最近两年在市场中流行多的设备,对于这种设备可能有些朋友们对此了解不全面,那么对于这种新型设备而言存有哪些优势特点呢?如果大家想要知道就请认真阅读下文。
双光束紫外可见分光光度计优势特点
优势特点一:使用该设备能够有效减少光源能量的漂移影响,这点可能大家很好进行理解的,在使用普通紫外可见分光光度计进行测量时候,当发生光源能量漂移情况后就会直接影响到测量的准确性,而使用双光束紫外可见分光光度计设备就能避免这种情况的发生。
优势特点二:使用这种设备能够减少温度变化而引起的溶液密度与折光率改变的情况影响,普通紫外可见分光光度计在对样品检测时候,会随着样品溶液密度和折光率的不同造成测量偏差的出现,而使用这种新型的设备就能避免这种情况发生了。
双光束紫外可见分光光度计实际用途
用途一:这种设备可以有效使用在相关药物分析用途中。在双光束紫外可见分光光度计设备中独有相关药物检测系统,再加上在国家药典中很多药品都是可以使用紫外可见分光光度计进行检测,在整个使用中不仅仅有使用简单方便优势,而且还能有效提高相关工作效率。
用途二:可以直接使用在生命科学用途中。双光束紫外可见分光光度计能对生命领域的微量样品进行测试不说,还能有效提供DNA蛋白质的检测可以快速检测出蛋白质的浓度,甚至还能使用设备设置不同分析方法进而满足相关一些不同需要。
用途三:可以直接使用在农业用途中。双光束紫外可见分光光度计在农业领域中可以对农业中的农药残留进行检测不说,也能对作物成分、兽药、饲料、化肥、土壤成分和水产养殖进行检测。