分光光度计nanodrop(分光光度计测蛋白含量)

海潮机械 2023-01-23 23:21 编辑:admin 130阅读

1. 分光光度计测蛋白含量

考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是较常用的方法,误差可尽量减到最小,需注意:测定OD值前,将分光光度计提前预热至少30分钟,可保证准确性;配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用;盐离子不会影响实验结果,但去污剂,如TRITONX-100,SDS等,会严重干扰实验结果。

2. 分光光度计测血清蛋白

葡萄糖测定是指对样本中葡萄糖进行定性或定量测定,样本可为血液或其他体液等。临床进行葡萄糖测定多用葡糖糖氧化酶法或己糖激酶法检测。此外,尿糖试纸法可对尿糖进行定性检测,具有快速、无创、廉价的优势,广泛应用于糖尿病初筛;便携式血糖仪可对血糖浓度进行床旁即时定量检测,方便而准确。

检测方法

1.葡萄糖氧化酶法

(1)原理 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应中释放过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶催化下与色原性氧受体缩合为红色化合物,此物质在505mm处有最大吸收峰,其吸光度值和葡萄糖量成正比。

(2)步骤 将血清和酶酚混合试剂混匀,置于适宜环境中保温保存,反应完毕后用调零过的分光光度计测定产物于505mm处吸光度值。根据光度值查表或计算可得到样品中葡萄糖浓度。

2.己糖激酶法

(1)原理 葡萄糖在己糖激酶和镁离子存在下可同腺嘌呤三磷酸腺苷(ATP)反应,其产物葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下可使NADP+还原为NADPH。测定NADPH在340nm处生成量,其生成量与标本中葡萄糖含量成正比。

(2)步骤 可用自动生化分析仪进行检测,将样品同酶混合试剂按比例混合后放入自动生化分析仪,可测定其吸光度增加速率,可根据标准曲线或公式得出样品中葡萄糖浓度。

3. 分光光度法测定蛋白含量

分光光度法不但能够确定核酸的浓度,还可以通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8,RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8,说明制剂中RNA尚未除尽。

4. 分光光度计测蛋白含量准确吗

优点该方法操作简单快速,显色反应产物的稳定性好,可以广泛使用于亚硝酸盐的测定。

缺点是水中亚硝酸盐浓度较高时,分光光度法的准确度较低;

食品中亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定——分光光度法原理 ,试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘二胺偶合形成紫红色染料,与标准比较定量,测得亚硝酸盐的含量。硝酸盐通过镉柱还原成亚硝酸盐,测得亚硝酸盐的总量,由总量减去亚硝酸盐的含量即得硝酸盐的含量

5. 分光光度法测蛋白

紫外分光光度法测定蛋白质含量。