1. 分光光度计280nm
紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。
原理： 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。
纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。
若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。
270nm存在高吸收表明有酚的干扰。
紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。
试剂与仪器： 提取的质粒DNA，紫外分光光度仪。
操作步骤：1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。
3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值。
如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如OD260=0.1，则样品浓度即为1μg/μl。
4) 若OD260/OD280大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。
2. 分光光度计2800
色温指的是光波在不同的能量下，人类眼睛所感受的颜色变化。
3200k的灯光颜色发白偏黄，更温和，属于暖白色。
在色温的计算上，是以 Kelvin 为单位，黑体幅射的 0° Kelvin= 摄氏 -273 ° C 做为计算的起点。将黑体加热，随著能量的提高，便会进入可见光的领域，例如，在 2800 ° K 时，发出的色光和灯泡相同，我们便说灯泡的色温是 2800 ° K。可见光领域的色温变化，由低色温至高色温是由橙红 --> 白 --> 蓝。
标准日光的色温大约在5200~5500°K，新闻摄影灯的色温在3200°K，一般钨丝灯的色温大约在2800°K。
3. 分光光度计标准曲线
标准曲线Y（吸光度0）＝AX（浓度）＋B
4. 分光光度计使用方法
1、使用前
在使用之前，需要做好以下准备工作：
准备好无水酒精以及无尘擦拭纸，使用洁净的指套进行清洁操作，准备好标准适配器。在条件允许的情况下最好准备一台至少200倍的便携式光放大镜。
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二、使用中
在使用时，拆开产品包装，并检查产品是否完好无损以及产品通道是否有防尘防护设备。接着，根据产品的型号选择相应光纤连接器进行连接。连接前对光纤连接器端面进行清洁，将蘸有酒精的擦拭纸平铺于桌面，至少铺三层以上，擦拭时注意沿着陶瓷面的角度向一个方向擦拭，不要来回擦拭，以防止损坏端面。
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三、完成清洁后：
1、分出输入和输出端口，然后取下防尘装置，装上连接器。安装连接器时，保持连接器的键面与适配器的缺口面一致，并沿着适配器水平插入，然后观察连接器上的白线是否和适配器边线平齐，以及安装是否到位。
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2、将输入端和每个输出端依次接入测试系统，并判定光学指标是否符合要求。
往光模块中插入光纤线时要求动作轻缓、正对着光口插入，用力过猛或斜着插入，有可能会损坏光模块； 光模块避免长时间暴露，暂不使用的光纤跳线和光模块不使用时务必及时塞上防尘帽，以免灰尘进入光模块而影响其性能。防尘帽不使用时储存在防尘干净处； 光纤连接器插入是水平对准光口，避免端面和套筒划伤。
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四、当光分路器的插入损耗过大时，需要检查以下几点：
1.跳线连接器的端面是否清洁
2.光分路器的连接器端面是否清洁
3.适配器陶瓷管是否清洁
4.进口、出口纤的弯曲半径不得小于30mm，且不能受外力的挤压，清洁连接器端面和适配器。
5. 分光光度计280nm波长不稳定
蛋白质组成氨基酸中的苯丙酮酸、酪氨酸和色氨酸含有苯环共轭双键，具有光吸收能力。苯丙氨酸的最大吸收波长在259，酪氨酸最大吸收波长在278，色氨酸最大吸收波长在279。一般采用紫外分光光度计在在280nm处测量。
6. 分光光度计调零
0%是假设到光度检测器 的光强 为0 100%是假设到光度检测器 的光强为1 ，这个是通过系统来调整的 设置的 我有些分光度计的 PPT 课件 ，你需要的话,
7. 分光光度计使用注意事项
1.在接通电源之前，电表的指针必须位于“0”刻度线，否则应旋转电表上的校正螺丝调节到位。
2.打开比色皿室的箱盖和电源开关， 使光电管在无光照射的情况下预热 15min 以上。
3.旋转波长调节器，选择测定所需的单色光波长。 选择适当的灵敏度，一般先将灵敏度旋钮调至中间位置，用零点调节器调节电表指针至 T 值为 10%处。 若不能调到，应适当增加灵敏度。
4.放入空白溶液和待测溶液，使空白溶液置于光路中，盖上比色皿室箱盖，使光电管受光，调节光量调节旋钮使电表在 T 值为100%处。
5.打开比色皿室箱盖（关闭光门），调节零点调节器使指针在 T 值为 0%处，然后盖上箱盖（打开光门），调节光量调节旋钮使指针在 T 值为 100%处。如此反复调节，直到关闭光门时和打开光门时指针分别在 T 值为 0%和 100%处为止。
6.将待测溶液置于光路中，盖上箱盖，由此时指针的位置读得待测溶液的 T 值或 A 值。
7.测量完毕后，关闭开关，取下电源插头，取出比色皿洗净擦干、放好。 盖好比色皿暗箱，盖好仪器。
8. 分光光度计的组成
色散型光谱仪主要由光源、分光系统、检测器三部分组成。
1、光源产生的光分为两路：一路通过样品，一路通过参比溶液。
2、切光器控制使参比光束和样品光束交替进入单色器。
3、检测器在样品吸收后破坏两束光的平衡下产生信号，该信号被放大后被记录。
拓展资料
傅里叶变换红外光谱仪
主要由红外光源、分束器、干涉仪、样品池、探测器、计算机数据处理系统、记录系统等组成，是干涉型红外光谱仪的典型代表，不同于色散型红外仪的工作原理，它没有单色器和狭缝，利用迈克尔逊干涉仪获得入射光的干涉图，然后通过傅里叶数学变换，把时间域函数干涉图变换为频率域函数图（普通的红外光谱图）。
1、光源：傅里叶变换红外光谱仪为测定不同范围的光谱而设置有多个光源。通常用的是钨丝灯或碘钨 灯（近红外）、硅碳棒（中红外）、高压汞灯及氧化钍灯（远红外）。
2、分束器：分束器是迈克尔逊干涉仪的关键元件。其作用是将入射光束分成反射和透射两部分，然后 再使之复合，如果可动镜使两束光造成一定的光程差，则复合光束即可造成相长或相消干涉。
对分束器的要求是：应在波数v处使入射光束透射和反射各半，此时被调制的光束振幅最大。根据使用波段范围不同，在不同介质材料上加相应的表面涂层，即构成分束器。
3、探测器：傅里叶变换红外光谱仪所用的探测器与色散型红外分光光度计所用的探测器无本质的区 别。常用的探测器有硫酸三甘钛（TGS）、铌酸钡锶、碲镉汞、锑化铟等。
4、数据处理系统：傅里叶变换红外光谱仪数据处理系统的核心是计算机，功能是控制仪器的操作，收集 数据和处理数据。