1. 蛋白质检测方法双缩脲什么颜色
蛋白质是由多条肽链组成的，而组成蛋白质的肽链，是由许多氨基酸组成的，这些氨基酸，每两个之间通过脱水缩合形成酰胺键，而双缩脲试剂就是和这个酰胺键发生反应。这个是蛋白质和双缩脲产生颜色反应的直接原因，也是化学原因。
2. 双缩脲检测蛋白质颜色变化
用双缩脲试剂检验蛋白质，溶液变成紫色。
检验蛋白质的是双缩脲试剂，检测还原糖是斐林试剂，
而双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液；
双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
斐林试剂虽然甲液乙液的浓度与其AB液不同，也是由NaOH ，CuSO4 组成，
这样，两者的检验也会有一定的影响
3. 双缩脲试剂检测蛋白质的颜色变化
双缩脲试剂检测蛋白质原理是双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有很多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度。
双缩脲法测定蛋白质的优缺点：
优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好，双缩脲试剂可以长期保存。
缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
干扰测定的物质包括有：在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。
4. 双缩脲比色法测定蛋白质含量注意事项
1、简述双抗体夹心法（ELISA）原理定义、操作过程、注意事项。
（1）原理定义：将可溶性的抗原或抗体吸附到固相载体上，并保持其免疫活性，使之结合并吸附结合抗体或抗原，通过洗涤去除未结合成分，再与酶标记的抗体或抗原结合，并保留酶的活性，然后加入酶反应的底物，后者被催化变为有色产物，根据反应颜色的深浅进行免疫反应的定性和定量的方法。
（2）操作过程：
①用一直抗体包被固相载体；
②加入受检的标本（含待测抗原），使抗原与固相上的抗体结合；
③加入以辣根过氧化物酶标记的已知抗体，使之与抗原结合。标记的酶可催化底物（四甲基联苯胺）起显色反应，从而指示特异性抗原抗体反应的存在。
（3）注意事项：
①对倍稀释抗原混匀时不要产生太多气泡；
②酶标板要洗涤干净不要交叉污染；
③加样时从最低稀释度逐一加至最高稀释度。
2、比较聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳。
（1）相同点：都是电泳方法 ，可用于物质的分离与鉴定。
（2）不同点：前者利用蛋白质分子大小形状的差异进行分离，后者利用的是两性电解质形成的光滑pH使蛋白质停留在与其pI相等的位置上进行分离；前者有扩散的作用，后者无扩散作用，因而物质更集中，分辨率高；电泳时间加长，前者电泳效果会变差，后者可使同一蛋白区带更狭窄，利于分辨。
3、比较向聚丙烯酰胺薄膜层析和凝胶柱层析。
（1）相同点：都是层析方法，可用于分离物质；固定相均为固体，流动相均为液体；与分离物质不发生反应，分离后可鉴定。
（2）不同点：前者属于特殊的吸附分配层析，后者属于分子筛层析；前者通过荧光观察判断分离物质，后者通过收集液的显色反应；前者原理与分离物质与聚丙烯酰胺薄膜形成氢键有关，后者利用分子颗粒大小有关。
4、使牛蛙红细胞细胞融合的试剂及其原理；红细胞计数。
（1）PEG；PEG具有强烈的吸水和凝聚沉淀蛋白质的作用，可改变细胞膜的结构，使两细胞接触点处脂类分子发生分散和重组，引起细胞融合。
（2）计数：格子数；稀释倍数。
5、两种核酸提取的基本要求和鉴定方法。
（1）DNA
基本要求：保持DNA大分子的完整性及纯度；避免机械张力剪切，操作轻柔；注意对杂质蛋白和RNA的去除；防止DNA酶对DNA的降解。
鉴定方法：A260/A280比值在1.8左右；琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光显色，观察条带。
（2）RNA
基本要求：全程要防止RNA酶污染，对实验器具要预先处理，可加入特异性RNA酶抑制剂，实验中要佩戴一次性口罩手套。
鉴定方法：A260/A280比值在2.0左右；琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光显色，观察28S亮度是否为18S两倍。
6、PCR的原理以及反应体系中各组分的作用。
（1）PCR原理：
该技术是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的情况下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段DNA片段来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3’-OH末端，并以此为起点，沿模板5’→3’方向延伸，合成一条新的DNA互补链。而新合成的链又可作为下一轮反应的模板，如此循环往复，每循环一次，DNA分子数即按指数倍增（2n）。
（2）反应体系中各物质作用：
①模板DNA：DNA复制模板；
②引物：开始阶段结合到DNA模板的一段互补序列部位，启动DNA双链的合成；
③4种脱氧核苷酸：合成DNA原料；
④耐热的DNA聚合酶：催化DNA链合成；
⑤适宜的缓冲液：维持合适pH，以保持酶的活性并帮助DNA解除缠绕结构。
7、小鼠脾单个核细胞的分离，离心后从上到下都是什么成份；分离的原理；淋巴细胞浓度的计算。
（1）从上到下分别是：稀释的血浆；单个核细胞；粒细胞；红细胞。
（2）原理：本次实验根据颗粒沉降原理，将不同密度的小鼠脾脏细胞置于淋巴细胞分离液上进行水平式离心，使单个核细胞在其沉降运动中位于分离液洁面上；达到分离小鼠脾单个核细胞的目的。已知小鼠淋巴细胞和单核细胞的密度约为1.088，而红细胞与粒细胞的密度均大于1.088。因此，用密度为1.088±0.001的淋巴细胞分离液通过密度梯度离心方法，可从小鼠脾脏细胞分离得到单个核细胞。
（3）计数：格子数；稀释倍数。
8、简述对流免疫电泳原理。
对流免疫电泳是电泳技术与双向琼脂扩散技术相融合而形成的一种定向加速的凝胶内免疫沉淀反应。与双向琼脂扩散技术中抗原与抗体分别向四周自由扩散不同，对流免疫电泳在凝胶中加一直流电场，抗原和抗体受到电泳和电渗两种力量的综合作用而向某一方向定向加速移动，因此可以提高灵敏度，明显缩短反应时间。
9、写出2种蛋白质定量方法，并择一详述。
（1）标准曲线法；标准管法。
（2）标准曲线法：双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与铜离子络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行鉴定。
10、简述等电聚焦电泳中Ampholine& AP & TEMED、聚酰胺薄膜、秋水仙素、细胞融合中PEG、DNA纯化中EDTA & SDS、CDC实验中石蜡油 & 抗淋巴血清 & 细胞培养液 & 补体 & 锥蓝的作用。
（1）Ampholine：在直流电场作用下，能从正极到负极形成一个pH逐渐升高的平滑连续而且稳定的pH梯度，从而在电泳中实现等电点不同的物质的分离；
AP：引发凝胶的聚合；
TEMED：加速凝胶的聚合。
（2）聚酰胺薄膜：由于分离物质和展层剂的不同，其与聚酰胺薄膜上的酰胺基团竞争形成氢键的能力也不同，从而可以利用其泳动速度差异，实现不同种物质的分离。
（3）秋水仙素：抑制纺锤体形成，使细胞周期停留在中期，便于观察。
KCl低渗溶液：使得细胞膨胀，利于中期染色体的观察。
（4）PEG：具有强烈的吸水和凝聚沉淀蛋白质的作用，可改变细胞膜的结构，使两细胞接触点处脂类分子发生分散和重组，引起细胞融合。
（5）EDTA：络合二价金属离子，当Mg2+被络合后，细胞内释放出来的DNA酶被抑制，避免DNA的降解，同时金属离子络合后，细胞膜稳定性下降，有利于膜的裂解；
SDS：使蛋白质变性，能破坏膜蛋白的构象，使膜裂解，又能使核蛋白中的核酸与蛋白质解离，并且SDS也具有抑制DNA酶的作用。
（6）石蜡油：密封细胞反应板，防止污染，利于孵育；
抗淋巴血清：作为抗体提供补体结合位点与补体结合，使其活化形成MAC；
细胞培养液：作为抗体的阴性对照；
补体：与抗体的补体结合位点结合，活化形成MAC，检测是否有特异性抗原；
锥蓝：使死细胞着色，通过光学显微镜观察，可以测得死细胞百分率。
5. 双缩脲检验蛋白质颜色变化
双缩脲试剂是由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.01g/mL的CuSO4组成的可看出碱是过量的,而蛋白质的鉴定是因为肽健与二价铜离子在碱性条件下结合成了紫色的络合物,因为肽健与双缩脲结构相似
6. 蛋白质检验双缩脲变色
加入双缩脲试剂看是否变砖红色,若变色则有蛋白质,若不变色则无蛋白质。
7. 蛋白质检测方法双缩脲现象
蛋白质用双缩脲试剂检测。 双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。 双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。
当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。
可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜，而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境，因此它可被其他碱，如氢氧化钠所代替。
向试剂中加入碘化钾，会延长试剂的使用寿命。
酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。
8. 双缩脲试剂鉴定蛋白质颜色变化
蛋白质盐析后还是会变成紫色。
因为盐析是不会破坏蛋白质的肽键。盐析是改变蛋白质的空间结构，不涉及肽键改变。
这个反应实际上是蛋白质的肽键与双缩脲试剂反应,所有蛋白质都含有肽键,所以所有的蛋白质与双缩脲试剂反应都成紫色反应.