蛋白质检测的原理(怎样检测蛋白质)

海潮机械 2023-01-22 12:37 编辑:admin 270阅读

1. 怎样检测蛋白质

WB实验的基本原理:

蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除 ELISA 法外,也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。

与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

三、WB实验步骤

(一)试剂准备

(二)蛋白样品制备

(三) 蛋白含量的测定

(四)SDS-PAGE电泳

(五)转膜

(六)免疫反应

(七)化学发光,显影,定影

(八)凝胶图象分析

2. 怎样检测蛋白质活性

硫氧还蛋白的还原活性检测是:

硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin reductase),是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员。硫氧还蛋白还原酶和硫氧还蛋白、NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。硫氧还蛋白还原酶有很多生物学功能,与人类某些疾病的发病机制也密切相关。 迪信泰检测平台采用生化的方法检测辅酶类物质,使用相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测硫氧还蛋白氧化还原酶。此外,我们还提供其他辅酶类的检测服务,以满足您的不同需求。

3. 怎样检测蛋白质变性

所有的蛋白质都有一个空间结构和蛋白质变性,就是属于蛋白质,原本的空间结构发生的改变造成了蛋白质的功能的改变,这就是蛋白质变性的本质,还有变性的特点,变性的特点,最大的特点就是不可逆性也就是一旦蛋白质变性之后,就不会再变回原来的样子

4. 蛋白质的检测方法

体重秤只能测体重数据,不能测出体内蛋白质是否偏高,需要去医院做一个尿常规检查,如果出现蛋白质含量太高,建议清淡饮食,少吃蛋白质含量高的食物,多吃含维生素的食物,日常生活要注意适当的锻炼身体,听从医生都嘱咐,好好配合治疗。

5. 怎样检验蛋白质的存在

一、物理性质

蛋白质是生物体内一种极重要的高分子有机物,占人体干重的54%。蛋白质主要由氨基酸组成,因氨基酸的组合排列不同而组成各种类型的蛋白质。人体中估计有10万种以上的蛋白质。生命是物质运动的高级形式,这种运动方式是通过蛋白质来实现的,所以蛋白质有极其重要的生物学意义。人体的生长、发育、运动、遗传、繁殖等一切生命活动都离不开蛋白质。生命运动需要蛋白质,也离不开蛋白质。

营养学上根据食物蛋白质所含氨基酸的种类和数量将食物蛋白质分三类:

1、完全蛋白质这是一类优质蛋白质。它们所含的必需氨基酸种类齐全,数量充足,彼此比例适当。这一类蛋白质不但可以维持人体健康,还可以促进生长发育。

2、半完全蛋白质这类蛋白质所含氨基酸虽然种类齐全,但其中某些氨基酸的数量不能满足人体的需要。它们可以维持生命,但不能促进生长发育。

3、不完全蛋白质这类蛋白质不能提供人体所需的全部必需氨基酸,单纯靠它们既不能促进生长发育,也不能维持生命。

根据蛋白质分子的外形,可以将其分作3类

1.球状蛋白质分子形状接近球形,水溶性较好,种类很多,可行使多种多样的生物学功能。

2.纤维状蛋白质分子外形呈棒状或纤维状,大多数不溶于水,是生物体重要的结构成分,或对生物体起保护作用。

3.膜蛋白质一般折叠成近球形,插入生物膜,也有一些通过非共价键或共价键结合在生物膜的表面。生物膜的多数功能是通过膜蛋白实现的。

二、化学性质

①具有两性

蛋白质是由α-氨基酸通过肽键构成的高分子化合物,在蛋白质分子中存在着氨基和羧基,因此跟氨基酸相似,蛋白质也是两性物质。

②可发生水解反应

蛋白质在酸、碱或酶的作用下发生水解反应,经过多肽,最后得到多种α-氨基酸。

蛋白质水解时,应找准结构中键的“断裂点”,水解时肽键部分或全部断裂。

③溶水具有胶体的性质

有些蛋白质能够溶解在水里(例如鸡蛋白能溶解在水里)形成溶液。

蛋白质的分子直径达到了胶体微粒的大小(10-9~10-7m)时,所以蛋白质具有胶体的性质。

④蛋白质沉淀

原因:加入高浓度的中性盐、加入有机溶剂、加入重金属、加入生物碱或酸类、热变性

少量的盐(如硫酸铵、硫酸钠等)能促进蛋白质的溶解。如果向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液,可使蛋白质的溶解度降低,而从溶液中析出,这种作用叫做盐析.

这样盐析出的蛋白质仍旧可以溶解在水中,而不影响原来蛋白质的性质,因此盐析是个可逆过程.利用这个性质,采用分段盐析方法可以分离提纯蛋白质.

⑤蛋白质的变性

在热、酸、碱、重金属盐、紫外线等作作用下,蛋白质会发生性质上的改变而凝结起来.这种凝结是不可逆的,不能再使它们恢复成原来的蛋白质.蛋白质的这种变化叫做变性.

蛋白质变性后,就失去了原有的可溶性,也就失去了它们生理上的作用.因此蛋白质的变性凝固是个不可逆过程.

造成蛋白质变性的原因

物理因素包括:加热、加压、搅拌、振荡、紫外线照射、X射线、超声波等:

化学因素包括:强酸、强碱、重金属盐、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。

⑥颜色反应

蛋白质可以跟许多试剂发生颜色反应.例如在鸡蛋白溶液中滴入浓硝酸,则鸡蛋白溶液呈黄色.这是由于蛋白质(含苯环结构)与浓硝酸发生了颜色反应的缘故.还可以用双缩脲试剂对其进行检验,该试剂遇蛋白质变紫

⑦蛋白质在灼烧分解时,可以产生一种烧焦羽毛的特殊气味.

6. 用什么试剂检测蛋白质

蛋白质的測定方法:取两支试管编号为甲乙,在甲试管中放入适量的待测蛋白质,乙试管放入与甲试管等量己知蛋白质,再在甲乙试管加入等量双缩脲试剂,观察甲乙两试管的颜色变化。

7. 用什么检测蛋白质

蛋白质印迹(免疫印迹试验)即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息

蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所(Friedrich Miescher Institute)Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981所著《析物化》(Analytical Biochemistry)首称Western Blot蛋白免疫印迹(Western Blot)电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

8. 怎样检测蛋白质缺乏

缺乏蛋白质时,在身体的各个部位会出现症状,头发枯黄断裂,没有光泽,缺乏弹性,出现脱发现象,记忆力衰退,头痛,失眠脑细胞的数量减少,思维不活跃等,胶原蛋白和弹性蛋白减少,皱纹出现骨质疏松,关节疼痛,另外,缺乏蛋白质的话,会导致肾虚,