1. 酶标仪与分光光度计的实验报告
分光光度计测量的是以空白溶液为参比,在约定厚度(一般为1cm)的量池中的相对吸光值。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。 而酶标仪测定时其光路长度不确定,也无空白参比,得出的是特定条件下的绝对值,因此即使是同一台仪器,不同测量批次之间也其数据不具备直接的可比性。
2. 分光光度计 酶标仪
酶标仪是一台变相的光电比色计或分光光度计,其工作原理与主要结构跟光电比色计几乎完全相同。酶标仪主要由光源系统、单色器系统、样品室、探测器和微处理器控制系统等组成。 光源灯发出的光线经过滤光片或单色器后,成为一束单色光。该单色光束经过酶标板中的待测标本,被标本吸收掉一部分后,到达光电检测器。
光电检测器将投照到上面的光信号的强弱转变成电信号的大小。
此电信号经前置放大、对数放大、模数转换等处理后,送人微处理器进行数据处理和计算,最后通过显示器和打印机输出测试结果。
3. 酶标仪与分光光度计的实验报告对比
方法/步骤分步阅读
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先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
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按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
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接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
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在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2),向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数),将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
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用酶标仪测定在450nm处的吸光度。若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
总结:
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1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度。
3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
注意事项
如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基。
当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
4. 荧光分光度计的使用实验图
因为荧光是属于由一种某波长的光来激发样品后样品再发出的光,一般来说,样品发出的荧光是很弱的,如果这时候的光路路线和其他像紫外可见或者可见分光光度计一样的话,接收器接收到的光信号基本上是激发光被样品吸收后的信号了,这是因为荧光已经被淹没在激发光了面了。
为了解决这个问题,最好的做法就是把接收器放在与激发光方向两侧,与激发光方向垂直的方向来接收荧光,这样就可以大大的降低激发光对荧光的影响了。
5. 荧光分光光度计操作实验报告
1、开机顺序
(1)开启计算机。
(2)开启仪器主机电源。按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)。同时,观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来,都显示绿色。
2、打开运行软件。
(1)双击桌面图标 (FL Solution 2.1 for
F-7000)。主机自行初始化,扫描界面自动进入。
(2)初始化结束后,须预热15-20分钟,按界面提示选择操作方式。 3、关机顺序(逆开机顺序实施操作):
(1)关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000。
(2)关闭仪器主机电源。
(3)关闭计算机。
注意事项
(1) 注意开机顺序。步骤1-(2)若是未先开主机,则程序会抓取不
到主机讯号。
(2) 注意关机顺序。
(3) 为延长仪器使用寿命,扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不
宜选在高档。
(4) 关机后必须半小时(等氙灯温度降下)方可重新开机。
6. 分光光度计和酶标仪
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