1. 当用分光光度计进行比色测定时,应
荧光层析法看结果的方式:
1、定性分析:
层析后的斑点显示出来后,计算出各斑点的迁移率,即可以对物质进行定性分析。
2、定量分析:
(1)剪洗比色法:
将斑点剪下,用适当的溶剂洗脱后,通过分光光度计进行比色定量。
(2)直接比色法:
用特制的分光光度计直接测量滤纸上斑点颜色的浓度,画出曲线,由曲线所包含的面积可求出待测物的含量。
(3)面积测量法:
实验证明,圆形或椭圆形斑点的面积与物质含量的对数成正比,所以可用测量斑点面积的方法求得物质的含量。
2. 用分光光度计进行比色测定时,必须选择
分光光度计正确操作使用方法:
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较高档。)
3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向t=0处。
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的t=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
3. 分光光度计的比色皿样品液应为
分光光度计比色皿应洗净并用蒸馏水冲洗清洁,并用干净、柔软的绸布将水迹擦净,以防止表面光洁度破坏影响吸收池的透光率。若吸收池透光内壁沾污,可用柔软绸布,滴上酒精液后,轻轻摩擦,再用蒸馏水冲洗清洁擦净,晾干防尘保存。
4. 分光光度计进行比色时采用的波长为
一、测定原理
在酸性溶液中,乙醇可被重铬酸氧化生成乙酸,重铬酸钾中的六价铬被还原成三价铬,其反应式为: 3C2H5OH+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2K2SO4+2Cr2(SO4)+11H2O
反应中生成的三价铬为绿色,它在585nm处有最大吸收峰,且溶液颜色的深浅与乙醇含量成正比,可以在分光光度计上比色,通过与标准系列进行比较进行定量。
二、仪器与试剂
1、 UV-1300紫外可见分光光度计(美析仪器)
2、 蒸馏装置
3、PHS—3C酸度计
4、乙醇标准溶液:准确吸取2.00mlGR级无水乙醇,置于预先装有少量蒸馏水的100ml容量瓶中,混匀,加水定容至刻度,摇匀备用。
5、重铬酸钾溶液,称取10.00gAR级K2Cr2O7,用少量水溶解,并定容至250ml。
6、浓硫酸:AR级,含量95~98%。
7、1%溴百里酚蓝指示剂
8、 NaoH溶液:C(NaoH)=1.0mol/L
三、测定方法
1、标准曲线的绘制
取7支25mlA级比色管,各加入2.00ml重铬酸钾溶液和2.50ml浓H2SO4,混匀,并冷却,依次加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.25ml乙醇标准溶液,混匀,反应10分钟后加水至刻度,再次混匀,以0号管调零,于585nm波长处分别测定其吸光度,绘制标准曲线。
2、样品的制备
准确移取100.00ml样品于250ml蒸馏烧瓶中,加入25mH2O,再加数滴溴百里酚蓝指示剂,用NaoH溶液滴定至蓝色(深色样品用酸度计指示中和至中性),加几粒沸石,连接好蒸馏装置进行蒸馏,馏出液用100ml容量瓶收集,接收瓶用冰浴进行冷却,缓慢蒸馏至接近刻度时取下,放入20℃水浴中30分钟,用H2O定容至刻度,摇匀,备用。
3、样品的测定
取1.00ml制备好的样品,按标准曲线绘制的方法进行测定,利用回归方程计算出样品中乙醇的含量。
5. 简述分光光度法测定样品时,选用比色皿
这个根据标准要求准备的,一般分玻璃还是石英,还有就是比色池长度等指标。测平行样至少要2只的。
6. 在一般分光光度法测定中
有没有可能是因为离子化的原因,加一点抗离子化试剂。比如氯化锶
其次最好做一个标准曲线,看看aas是否线性度好。
还有你测6价铬的方法会不会收到干扰导致偏高,一般六价铬有氧化还原法测比较多,有受氧气干扰的可能。
最好谈谈你的测试方法,不然也不好猜测和分析。
7. 分光光度法中,选用λmax进行比色测定原因是
朗伯比尔定律。物质对光是有选择性吸收的,不同的物质对不同波长的光的吸收是不一样的。朗伯比尔定律揭示了物质对光的吸收是和物质的含量有一定的关系的。