1. 分光光度计280nm
丙酮本身的结构决定的吧,看光谱图就知道了。紫外截止波长是以空气为参比,光程为1cm时产生1ABS时相应的最低波长,丙酮的截止波长为330nm,那么当波长小于330nm时,280nm肯定有吸收。
蛋白质组成氨基酸中的苯丙酮酸、酪氨酸和色氨酸含有苯环共轭双键,具有光吸收能力。
苯丙氨酸的最大吸收波长在259,酪氨酸最大吸收波长在278,色氨酸最大吸收波长在279。一般采用紫外分光光度计在在280nm处测量。
2. 分光光度计使用方法
1.把紫外分光光度计电源线连接好;
2.接通电源后,按动开机开关,然后让仪器预热至少20分钟;
仪器校准,输入相应波长 然后调节仪器吸光度为0;
3.使用“方式”键测试的方式,再根据自己要测量的结果选透光率、吸光度、和浓度的测试;
4把样品溶液和要测定的溶液各自倒入比色皿中后;
然后打开样品盖,把盛着溶液的比色皿插入另一个比色皿中,盖好样品盖;
6.把参比的溶液拉到光路中按住“OABS/100%T”键;
这时的显示器会显示出BLANKING,,直到显示出“100%T”或者是“0.000A”为止;
7.仪器显示出“100%T”或者是“0.000A”即可结束测试。
这时被测样品的透光度、吸光度等参数就可直接读出;
8.分光光度计使用完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
3. 分光光度计原理
分光光度法的原理是利用朗伯比尔定律,物质对光是有选择性吸收的,不同的物质对不同波长的光的吸收都是不一样的。
由于不同的物质其分子结构不同,对不同波长光的吸收能力也不同,因此具有特征结构的结构集团,存在选择吸收特性的最大实收波长,形成最大吸收峰,而产生特有的吸收光谱。
即使是相同的物质由于其含量不同,对光的吸收程度也不同。
4. 分光光度计280
蛋白质电泳条带怎么看 不能严格定量,只能互相比较。 无论什么染色法,条带亮度会随着染液多少及染色时间的不同而变化,无法严格定量。
page的作用更多的是看目的条带的大小,以及两个样品中相同蛋白互相比较多少。不能精确算出是多少ug或ng。
1.直接将带条带的凝胶放在 凝胶呈像系统 中进行定量分析. 2.将所需要的条带剪切下来,用X体积蒸馏水溶解,通过紫外分光光度计在280nm条件下,测定吸光度A值.根据仪器目前标准曲线计算蛋白质浓度,与蒸馏水体积X相乘,得到蛋白质质量. 3.如果样品中含有荧光成分,可以进行荧光分析.
5. 分光光度计的主要部件
分光光度计检测灵敏度主要由检测方法决定、检测器本身部件影响不大、比如测定磷酸根含量磷钼蓝法就比磷钼黄法灵敏度高很多!