1. 红外光谱分光光度计
紫外可见分光光度计的工作原理
1.紫外可见分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似,利用一定频率的紫外可见光照射被分析的有机物质,引起分子中价电子的跃迁,它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱,反映了试样的特征。
2.紫外可见光的范围内,对于一个特定的波长,吸收的程度正比于试样中该成分的浓度,因此测量光谱可以进行定性分析,而且根据吸收与已知浓度的标样的比较,还能进行定量分析。
2. 红外分光分光度计使用
红外线水平仪的使用方法具体如下:
1、使用前应先检验该百分表是否在受控范围,零位进行校对或调整,将水平仪放在平台上,待气泡稳定后,在一端吐左端读数,且定为零。
2、将水平仪调转180度,扔在平台上原来的位置上,待气泡稳定后,仍在原来一端(左端)读数A格,则水平仪零位误差为二分之A格。
3、测量时,使水平仪工作面津贴在被测表面,待气泡完全静止后方可进行读数。
关于水平仪测量的注意事项:
1、调整前水平仪工作面与平板必须擦拭干净。
2、测量前若零位误差超过许可范围,则需调整水平仪零位调整机。
3、如需测量长度为L的实际倾斜侧可通过下式进行计算:实际倾斜值=分度值*L*偏差格数。
4、当测量长度较大工件时,可将工作平均分若干寸段,用分段测量法进行测量。
3. 红外分光光度法测定
分光光度计介绍:
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。该仪器是食品厂、饮用水厂办理QS、HACCP认证的必备检验设备。
分光光度计原理:
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计组成:主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
分光光度定义:
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。
常用的波长范围:
(1)200~400nm的紫外光区
(2)400~760nm的可见光区
(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区
所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。
分光光度计的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定。因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。
分光光度计操作方法:
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较)。
3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向t=0处。
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的t=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
分光光度计注意事项:
1.该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2.使用本仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
3.在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
4. 红外分光分光度计
红外光谱仪的原理是利用物质对不同波长的红外辐射的吸收特性,进行分子结构和化学组成分析的仪器。红外光谱仪通常由光源,单色器,探测器和计算机处理信息系统组成。根据分光装置的不同,分为色散型和干涉型。
对色散型双光路光学零位平衡红外分光光度计而言,当样品吸收了一定频率的红外辐射后,分子的振动能级发生跃迁,透过的光束中相应频率的光被减弱,造成参比光路与样品光路相应辐射的强度差,从而得到所测样品的红外光谱。
5. 近红外分光光度计
红外分光光度计特点: 灵敏,,快速和简便,在复杂组分系统中,不需要分离,即能检测出其中所含的极少量物质.
基本工作原理:用一定频率的红外线聚焦照射被分析的试样,如果分子中某个基团的振动频率与照射红外线相同就会产生共振,这个基团就吸收一定频率的红外线,把分子吸收的红外线的情况用仪器记录下来,便能得到全面反映试样成份特征的光谱,从而推测化合物的类型和结构。IR光谱主要是定性技术,但是随着比例记录电子装置的出现,也能迅速而准确地进行定量分析。
由光源发出的光,被分为能量均等对称的两束,一束为样品光通过样品,另一束为参考光作为基准。这两束光通过样品室进入光度计后,被扇形镜以一定的频率所调制,形成交变信号,然后两束光和为一束,并交替通过入射狭缝进入单色器中,经离轴抛物镜将光束平行地投射在光栅上,色散并通过出射狭缝之后,被滤光片滤除次光谱,再经椭球镜聚焦在探测器的接收面上。探测器将上述交变的信号转换为相应的电信号,经放大器进行电压放大后,转入A/D转换单位,计算机处理后得到从高波数到低波数的红外吸收光谱图。
6. 红外光谱仪和分光光度计
1、仪器分析的波长范围不一样
紫外可见分光光度计的波长范围是:200nm-1000nm,其中200nm-330nm标定为紫外光谱,330nm-800nm标定为可见光谱,800nm-1000nm标定为近红外光谱。 而可见分光光度计的波长范围只在可见光谱区内330nm-800nm。 2、仪器分析物质也不一样
紫外光谱大都分析有机物,可见光谱大都分析无机物,只是大部分有机物的吸收敏感点在紫外光谱区,无机物的吸收敏感点在可见光谱区。 3、在使用的光源有所不一
在目前国内外的分光光度计中,大部分紫外光源用的是氘灯,可见光源用的是钨灯。
紫外灯源的价格相对可见灯源的价格要高很多,当然也有一些用氙灯替代氘灯和钨灯,其价格高。 4、仪器结构设计不一样
紫外可见分光光度计要求仪器的体积相对可见分光光度计要大一些,这其中除了考虑多了一个灯的摆放位置,还要考虑到灯的散热。 5、还有仪器其它的一些不一样的,例如:电路设计原理、色散元件、光电转换元器件等。 6、可见分光光度计一般使用玻璃比色皿即可,而紫外可见分光光度计的紫外区段需使用石英比色皿(是黑色石英比色皿,可以遮挡杂光)。
7. 红外光谱分光光度计的作用
分光度计主要是检测,黑色金属材料所含元素,以及合金元素的,化学成分的定量分析的比色法测定,有色金属材料的所含元素的化学成分的定量分析的比色法测定,以及还有稀有元素的定量分析的比色法测定,还有有机材料元素的定量分析的比色法测定。
8. 红外分光分光度计光源
如果有红外线光源,找到其是否发出红外线的方法是打开手机照相机,镜头对准红外线光源,如果在手机屏幕显示很亮的光点,说明红外线光源正在发出红外线光。红外线是频率介于微波与可见光之间的电磁波,波长在1 mm 到760 nm 之间,频率比红光低的不可见光,用肉眼看不到红外线的。
9. 红外光谱分光光度计使用方法
红外分光测油仪采用红外分光光度测量,经对样品进行光谱扫描,可显示并打印样品光谱及吸收峰的波数位置,能迅速、准确地测出水体中油份浓度的全部含量。
主要应用领域:红外测油仪不仅适用于地表水、地下水、海水、生活用水和工业废水等各种水体及土壤中石油类(矿物油)、动植物油及总油含量的监测,同时也是烟气(饮食行业油烟)含油量监测国家标准推荐的仪器。
此外,还可用于有机试剂纯度检测及含各种不同c-h键有机物总量和分量的测量。