蛋白纯度检测方法(蛋白质纯度鉴定的三种方法)

海潮机械 2023-01-18 22:14 编辑:admin 203阅读

1. 蛋白质纯度鉴定的三种方法

如果你手上有比较大量的纯度比较高的蛋白质的话。可以尝试用以下比较直接的方法:

1. isothermal titration calorimetry (ITC),直接测定两个蛋白互相作用的Kd值。

2. AUC,也就是超速离心分析。可以直接测定两个蛋白相互作用与否。

3.SAXS, 也就是X-ray小角散乱。不过技术难度比较大一些。

4. 溶液NMR,这个应该可以但不太了解。

5. 结晶再解构,这个不用解释了。比较究极一点。

6.cryo-EM,同上。比较究级的方法。

7. 最简单常用的,gel-filtration,观察有没有oligomer的分子量峰出现。但是相互作用弱的话很难观测到。

8.更简单常用的nativePAGE,同上,相互作用弱则很难观测到。

9.用氨基架桥试剂共价连接,然后SDS-PAGE。看看有没有oligomer的带。暂时想到这些,跨度比较大。

2. 蛋白质纯化鉴定方法

蛋白质分离纯化常用方法有:

1、沉淀,

2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。

3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。

4、层析: a.离子交换层析,利用蛋白质的两性游离性质,在某一特定PH时,各蛋白质的电荷量及性质不同,故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析,含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。 b.分子筛,又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内,滞留时间长,大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。

5、超速离心:既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其密度与形态各不相同而分开。

3. 蛋白质鉴定方法有哪些

检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 实验目的 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,阐明实验原理—颜色反应,识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色,初步掌握鉴定上述化合物的基本方法,学会描述实验现象,掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。 实验材料 苹果或梨匀浆,花生种子,鸡蛋清,马铃薯匀浆。 实验用具 双面刀片、试管(最好用刻度试管)、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜 实验步骤 还原性糖的鉴定 实验原理 还原性糖 试剂 → 色沉淀 实验材料 实验 步骤

1、制备样液

2、取样(2mL注入试管)

3、加入刚刚混合均匀的 试剂1mL

4、水浴加热2分钟

5、观察颜色变化,预期将由 色变为 色。 淀粉的鉴定 实验原理 淀粉 → 色 实验材料 实验步骤 1、取样2mL 2、加入 ,观察颜色变化。 蛋白质的鉴定 实验原理 蛋白质 试剂 → 色 实验材料 实验 步骤 1、制备样液 2、取样2mL 3、加入 试剂的 液1mL,摇匀 4、加入 试剂的 液4滴,摇匀 5、观察颜色变化 脂肪的鉴定 实验原理 脂肪 试剂→ 色 实验材料 实验 步骤 1、制备材料(去种皮,切薄片) 2、加 试剂染色 分钟 3、用 试剂去薄片上的浮色 4、制成临时装片 5、放在显微镜下观察(先用低倍镜再转高倍镜)

4. 蛋白质纯度鉴定的三种方法有哪些

鉴别胶原蛋白粉有个法子很简单:将胶原蛋白肽粉末或颗粒倒少量在一张事先准备好的白纸上,将胶原蛋白肽的颜色与白纸的颜色进行比对。颜色越鲜亮,越接近白纸颜色的胶原蛋白肽品质越纯越好。现在很多胶原产品会添加杂物,对身体产生莫名伤害,建议选择有质量保障的产品,我暂时用的一个牌子的产品还不错,胶原蛋白肽精华+纯水果粉组成,蛋白质含量≥94%,用后也白了很多,呵呵

5. 蛋白质纯度鉴定的三种方法是

你想:最开始的浓度假设是xug/mL那么取了1ml蛋白质溶液,稀释到了100ml,则浓度为x/100ug/mL再取0.6mL,加入0.4ml蒸馏水和5ml考马斯后,浓度为x/100*0.6/6故x/100*0.6/6=12.777那么x=12.777*100*6/0.6ug/mL

6. 蛋白质纯度的测定方法

在评价样品纯度之前,首-先需要鉴定待测杂质的类型,如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质,进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征)。

而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。 需要注意的是,上述说明中并没有要求描述杂质的性质。 纯化过程可能已将某一杂质的浓度降低到检测下限以下,但色谱峰中还有残留。 毫无疑问,表观纯度取决于所选择的测定方法及其灵敏度。 由于大多数分离方法都能够有效地去除非蛋白质类杂质,因此本文将主要介绍蛋白质样品中蛋白质类杂质的检测方法。 目前有一些高灵敏度的方法可用于检测样品中的杂质。 其中每种方法测定分子的一种特定物理特性。

7. 蛋白质纯度鉴定的三种方法是什么

DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0,故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。若比值较高说明含有RNA,比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间,若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\OD230,则比值应在2-2.5之间,偏小则说明有残余盐剩余。

8. 如何检查一种蛋白质的纯度是否达到要求

【目的要求】:

了解:分光光度法测定DNA浓度和纯度的原理;

掌握:分光光度法测定DNA浓度和纯度的技术方法;

熟悉:分光光度法测定DNA浓度和纯度的实验操作步骤和注意事项。【实验原理】:

前面提取得到的DNA的浓度和纯度都是未知的,在后续的DNA酶切、连接及转化等实验中需要一定的浓度和纯度要求,因此要测定DNA的浓度和纯度。

测定DNA的方法通常有:紫外分光光度法;琼脂糖凝胶电泳法(也叫荧光光度法)

(1)紫外分光光度法:

组成DNA的碱基均具有一定的吸收紫外线特性,最大吸收值在波长为250~270nm之间,腺嘌呤的最大紫外线吸收值在260.5nm,胞嘧啶:267nm,鸟嘌呤:276nm,胸腺嘧啶:264.5nm,尿嘧啶:259nm。这些碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后其最大吸收峰不会改变,但核酸的最大吸收波长是260nm,吸收低谷在230nm。这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。在波长260nm紫外线下,10OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为40μg/ml;单链寡聚核苷酸为20μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。

分光光度法不但能够确定核酸的浓度,还可以通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8,RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8,说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况,所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA,或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质。紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液。

(2)琼脂糖凝胶电泳法(荧光光度法):

对于很稀的核酸溶液,可以用琼脂糖凝胶电泳法。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光,它插入到DNA分子中形成荧光结合物,使发射的荧光增强几十倍,而荧光的强度正比于DNA的含量,将已知浓度的标准样品作为电泳对照,就可以估计出待测样品的浓度。用量只需要5-10ng DNA即可,肉眼观察可检测0.05g-0.1g的DNA。该方法只是估计水平,另外还应考虑DNA或RNA样品中分子大小与标准对照中核酸分子的长度