1. 用什么试剂检测蛋白质实验现象呈现什么反应
双缩脲法
用于鉴定蛋白质的分析方法
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。鉴定反应蛋白质单位1-10mg。
基本信息
中文名
双缩脲法
外文名
Biuret method
成分
氢氧化钾、硫酸铜、酒石酸钾钠
名词解释
双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,可延长试剂的使用寿命。
基本概况
实验原理
双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差,不适合微量蛋白的测定。
试剂与器材
1. 试剂:
1.
1. 试剂:
(1)标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白(BSA)或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要,标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制,酪蛋白用0.05N NaOH配制。
(2)双缩脲试剂:称以1.50克硫酸铜(CuSO4·5H2O)和6.0克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O),用500毫升水溶解,在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液,用水稀释到1升,贮存于塑料瓶中(或内壁涂以石蜡的瓶中)。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制。
2. 器材:
1.
2. 器材:
可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。
操作方法
1.
标准曲线的测定:取12支试管分两组,分别加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的标准蛋白质溶液,用水补足到1毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后,在室温(20~25℃)下放置30分钟,于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值,以蛋白质的含量为横坐标,光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。
2、样品的测定:取2~3个试管,用上述同样的方法,测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。
2. 检测蛋白质的试剂和现象
可溶性还原糖 用菲林试剂 必须加热 有砖红色沉淀蛋白质 双缩脲试剂 紫色反应脂肪 苏丹3或苏丹4 苏丹3呈橘黄色 苏丹4呈红色 淀粉 用碘液 蓝色反应 (后3个不需加热的)还原糖 菲林试剂 水浴加热产生砖红色脂肪 苏丹3 4 染液 染成 红色或橘红蛋白质 双缩尿试剂 颜色反映 为紫色 是它与蛋白质中的肽键结合产生的淀粉 碘 显蓝色谢谢
3. 鉴定蛋白质的试剂现象
还原糖:用菲林试剂检验,反应产生砖红色沉淀;
蛋白质:用双缩脲实际检验,反应产生紫色络合物;
脂质:用苏丹Ⅲ染液或苏丹Ⅳ染液,反应产物颜色:苏丹Ⅲ染液是橘黄色,苏丹Ⅳ染液是红色.一般比较常用苏丹Ⅲ染液.
4. 鉴定蛋白质的试剂和现象
蛋白质的检测
(1)试剂:双缩脲试剂(A液:0.1g/mL的NaOH溶液,B液:0.01g/mL的CuSO4溶液)
(2)步骤:试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL,摇匀→加双缩尿试剂B液4滴,摇匀→观察颜色变化(紫色)具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应,蛋白质含有两个以上的肽键,因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关,因此可用比色法测定蛋白质含量。在一定条件下,未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应,并于540~560nm下比色,可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度。
5. 检验蛋白质试剂及现象
鉴定蛋白质用双缩脲,应该是紫色的这个实验中很容易看到的。
淀粉就用碘水了,但是加碘盐好像是不可以的。
蓝色,小孩都知道的。
葡萄糖用斐林试剂鉴定,要加热的。
砖红色,不过现在用尿糖试纸还是方便些
6. 蛋白质与什么试剂发生作用产生什么反应
仍然能够反应
双缩脲反应的实质是,蛋白质中的肽键在碱性条件下,与铜离子Cu2+发生双缩脲反应生成紫色的络合物。而蛋白质变性是由于强酸碱、重金属离子、高温、紫外线等原因破坏了蛋白质的空间结构,并没有深层次的破坏肽键,很常见的例子就是鸡蛋煮熟后人体仍然能够吸收大量的蛋白质,可见肽键并没有被破坏,所以变性的蛋白质仍然能够发生双缩脲反应。
7. 检测蛋白质用什么试剂现象以及注意事项
检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 实验目的 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,阐明实验原理—颜色反应,识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色,初步掌握鉴定上述化合物的基本方法,学会描述实验现象,掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。 实验材料 苹果或梨匀浆,花生种子,鸡蛋清,马铃薯匀浆。 实验用具 双面刀片、试管(最好用刻度试管)、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜 实验步骤 还原性糖的鉴定 实验原理 还原性糖 试剂 → 色沉淀 实验材料 实验 步骤
1、制备样液
2、取样(2mL注入试管)
3、加入刚刚混合均匀的 试剂1mL
4、水浴加热2分钟
5、观察颜色变化,预期将由 色变为 色。 淀粉的鉴定 实验原理 淀粉 → 色 实验材料 实验步骤 1、取样2mL 2、加入 ,观察颜色变化。 蛋白质的鉴定 实验原理 蛋白质 试剂 → 色 实验材料 实验 步骤 1、制备样液 2、取样2mL 3、加入 试剂的 液1mL,摇匀 4、加入 试剂的 液4滴,摇匀 5、观察颜色变化 脂肪的鉴定 实验原理 脂肪 试剂→ 色 实验材料 实验 步骤 1、制备材料(去种皮,切薄片) 2、加 试剂染色 分钟 3、用 试剂去薄片上的浮色 4、制成临时装片 5、放在显微镜下观察(先用低倍镜再转高倍镜)
8. 检测蛋白质的试剂是什么实验现象是什么
蛋白质用双缩脲试剂检测。 双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。 双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。
当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。
可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。
向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。
酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。