蛋白的检测(蛋白质的检测和观察)

海潮机械 2023-01-19 11:01 编辑:admin 203阅读

1. 蛋白质的检测和观察

如果你手上有比较大量的纯度比较高的蛋白质的话。可以尝试用以下比较直接的方法:

1. isothermal titration calorimetry (ITC),直接测定两个蛋白互相作用的Kd值。

2. AUC,也就是超速离心分析。可以直接测定两个蛋白相互作用与否。

3.SAXS, 也就是X-ray小角散乱。不过技术难度比较大一些。

4. 溶液NMR,这个应该可以但不太了解。

5. 结晶再解构,这个不用解释了。比较究极一点。

6.cryo-EM,同上。比较究级的方法。

7. 最简单常用的,gel-filtration,观察有没有oligomer的分子量峰出现。但是相互作用弱的话很难观测到。

8.更简单常用的nativePAGE,同上,相互作用弱则很难观测到。

9.用氨基架桥试剂共价连接,然后SDS-PAGE。看看有没有oligomer的带。暂时想到这些,跨度比较大。

2. 蛋白质的检测方法

要检验还用到质量分数为0.1 g/mL氢氧化钠溶液(A)和质量分数为0.01 g/mL硫酸铜溶液(B)先将土豆研磨后加入水制成土豆组织样液,在其中加入A2ml,摇荡均后加入双缩脲试剂B1ml,摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。其实市场上卖的土豆有两种 一中有点透明,吃起来脆,另一中颜色深些,吃起来面些前者是转基因的,增加了土豆中的蛋白质含量,但不那么好吃后者是传统土豆,好吃些,但是没多少蛋白质,营养不高

3. 蛋白质测序

免疫组化,是应用免疫学基本原理抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。

二代测序又称下一代测序技术,是对第一代测序技术的划时代变革的核心。

4. 测定蛋白质的方法

最简单的方法,也是人们最耳熟能详的方法,就是对物体进行灼烧,看是否能闻到烧焦的羽毛味,如果可以闻到烧焦的羽毛味,那么证明有蛋白质的存在。

中学的化学课上也教过我们不少的方法,比如说吧蛋白质和浓HNO3进行反应,如果能够变性产生黄色不溶性物质,那么该物体是蛋白质。

还有一种方法就是把含有蛋白质的屋子磨成浆然后过滤,取滤液进行测试,可以先在滤液中加氢氧化钠(NaOH),然后再加入双缩脲试剂,如果出现紫色反应,就为蛋白质。

除了比较通用的方法,还有一些高大上的方法也可以检测鉴定蛋白质,比如通过质谱仪,它的原理主要是根据肽质量指纹图谱与蛋白质数据库中蛋白质的理论PMF进行比对,从而鉴定蛋白质。除了比较通用的方法,还有一些高大上的方法也可以检测鉴定蛋白质,比如通过质谱仪,它的原理主要是根据肽质量指纹图谱与蛋白质数据库中蛋白质的理论PMF进行比对,从而鉴定蛋白质。

5. 蛋白质的检测和观察实验

1,在等电点附近,蛋白质溶液开始变浑浊,离心可见沉淀2,远离等电点,蛋白质溶液开始变澄清,离心未见沉淀

6. 蛋白组学分析

个人认为应该是蛋白质组学更有前景因为蛋白质组学是比基因组学起步要晚一些,属于后基因时代的科学了 不过预测这种事情都是不绝对的,也许某一天科学家在基因组学中发现了什么新技术,那么也有可能造成新的热点。